L-赖氨酸生产的氮源和生长因子替代与发酵条件优化--《吉林大学》2014年硕士论文
L-赖氨酸生产的氮源和生长因子替代与发酵条件优化
【摘要】：L-赖氨酸是脂肪族碱性氨基酸一种，化学名称是2,6-二氨基已酸，是人、动物生长发育所需的八种必需氨基酸（它们是赖氨酸、苏氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸及色氨酸）之一。是谷物蛋白第一限制氨基酸，在谷物食料中添加适量的赖氨酸，其蛋白质的生物价会提高很多，它是人和动物体内是自身不能合成的物质，必须从日常食物或者外界中摄取，赖氨酸是帮助其它营养物质被人体充分吸收和利用的关键物质,人体只有补充了足够的L-赖氨酸才能提高食物蛋白质的吸收和利用，达到均衡营养，对促进生物健康生长发育有着特殊重要意义、起着不可或缺的作用。全球约90%的赖氨酸用作饲料添加剂，约5%用作食品添加剂。目前国内外L-赖氨酸获取主要以微生物发酵方法生产，即以玉米淀粉乳制液体葡萄糖或结晶葡萄糖为主要原料，由特定微生物菌种在一定配方培养基及适宜培养控制条件下经生物发酵后提取、精制后获得。
国内外生产赖氨酸企业普遍以硫酸铵、液氨、毛发粉（毛发氨基酸）作为氮源、及以玉米浆、糖蜜作为辅助氮源、生长因子。但毛发粉在投料使用过程中，会让人产生不适，并产生气味，且部分生产毛发粉厂家产品会有重金属超标现象，在生产中，使用的综合性价比也要低于玉米浆，自制液体葡萄糖来自玉米淀粉乳，而玉米浆是由加工玉米淀粉乳中的玉米浸泡液浓缩后获得，通过管线供应，方便企业使用。综上所述，尽量在赖氨酸发酵培养过程中减少或不使用毛发粉作为培养基，已经成为发酵培养基优化的重要研究内容与方向。
甜菜碱作为新型培养基，现已大批使用在氨基酸（谷氨酸、赖氨酸、苏氨酸）发酵培养过程中，甜菜碱是一种从甜菜中发现的生物碱，其分子式为C5H11NO2。主要有维持细胞对酶的保护作用、抗盐持久性等特殊效应。甜菜碱盐酸盐中含有赖氨酸发酵所需大量生长因子，因来自甜菜提取物，并经过精制，所以添加效果要强于甜菜糖蜜，生化反应过程中甜菜碱盐酸盐作为甲基供体提供活性甲基，高半胱氨酸转变为蛋氨酸的过程，能够减少配料中蛋氨酸的添加，有利于降低生产成本。甜菜碱能够保护微生物避免受渗透压激变的影响提高了微生物的成活率，而且甜菜碱与很多催化生物酶具有很好的兼容性，甜菜碱有如此之多好处，引起氨基酸发酵行业人士高度关注，甜菜碱已成为氨基酸发酵的产酸促进剂，成为发酵行业研究的最新课题。具体研究如下：
1、种子罐培养基优化
以赖氨酸菌（黄色短杆菌）为生长菌，研究确定菌种在种子罐快速生长，保持菌种活力，缩短培养时间的氮源配方比例。在种子罐培养基中减少或不添加毛发粉后，因氮源配比数量减少，根据菌种生产需要适当增加其它氮源，我们以玉米浆作为补充，调高玉米浆比例以补充毛发粉减少量。通过试验确定种子罐配料可以不使用毛发粉，增加玉米浆的配料比例，将玉米浆配料比例提高到9%，可实现种子罐OD值快速生长，效果基本与添加毛发粉一致，并缩短培养时间。
2、发酵罐培养基优化
在发酵罐培养中，当菌种繁殖到一定程度，需代谢赖氨酸。因此我们着力研究经济而环保的培养基原材料。试验生产不使用毛发粉，提高玉米浆在培养基中比例到3.1%，不使用甜菜糖蜜，提高甜菜碱在培养基中比例到0.32%，减少蛋氨酸在培养基中的比例，将蛋氨酸添加量降低到0.013%，调整并优化培养基成分，在发酵罐培养中用苏氨酸生产离心工序中产生的母液代替商品苏氨酸用在配料中，节省商品苏氨酸的使用量，商品苏氨酸是固体，而苏氨酸母液是液体，使用苏氨酸母液不但降低了包装与干燥成本，并消化处理了苏氨酸母液，苏氨酸母液未加入发酵时，经常回配系统，增加处理成本。在发酵培养控制中，原补料时用双酶法制葡萄糖，现试验用结晶糖母液按一定比例与葡萄糖液混合用做发酵碳源，减少了液体葡萄糖的使用量，并消化过理了难已处理的结晶糖母液，实现了培养基的原料的综合利用，发酵结束放罐产酸率在18.5g/dl-19.2g/dl,糖酸转化率达到68-70%，分别较原有培养基：发酵产酸率提高0.04g/dl,转化率提高2%，缩短培养时间4hr、达到了减少能源消耗，降低生产成本的目的。并减轻环保压力，达到了降低生产成本的目
【关键词】：
【学位授予单位】：吉林大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2014【分类号】：TQ922.3【目录】：
摘要4-7Abstract7-12第1章 绪论12-23 1.1 研究课题的目的和意义12-16
1.1.1 课题的出发点和研究问题的提出12-13
1.1.2 课题的目的和意义13-16 1.2 赖氨酸的基本性质和用途16-18
1.2.1 赖氨酸的化学结构与性质16-17
1.2.2 赖氨酸及其盐酸盐、硫酸盐的应用17-18 1.3 赖氨酸的生产工艺18-21
1.3.1 化学合成法18
1.3.2 生物酶法18
1.3.3 微生物发酵法18-21 1.4 赖氨酸发酵工艺技术研究进展21-22
1.4.1 赖氨酸基本发酵工艺21
1.4.2 赖氨酸菌种选育技术21-22 1.5 本论文主要研究内容22-23第2章 赖氨酸菌种的有机氮源23-27 2.1 引言23 2.2 发酵试验材料23-24
2.2.1 样品23
2.2.2 主要试验仪器23
2.2.3 主要试剂23-24
2.2.4 培养基24 2.3 试验方法24-27
2.3.1 赖氨酸的两种测定方法24-25
2.3.2 斐林滴定法测定发酵液中残糖25
2.3.3 菌种的保藏与活化25-26
2.3.4 基本的发酵罐发酵工艺26-27第3章 发酵罐培养基配料工艺的优化27-46 3.1 引言27 3.2 试验材料27-29
3.2.1 菌种27
3.2.2 主要仪器与试剂27-28
3.2.3 培养基28-29 3.3 试验方法29-36
3.3.1 试验条件准备30
3.3.2 种子罐培养基成分的单因子试验30-35
3.3.3 正交试验优化培养基35-36 3.4 赖氨酸生产物料综合利用及改进36-46
3.4.1 发酵罐培养基成分的单因子试验36-43
3.4.2 正交试验优化培养基43-46第4章 结论与展望46-48参考文献48-52作者简介52-53致谢53
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京公网安备74号低氧培养的肝癌细胞中低氧诱导因子1的表达与血管生成和细胞凋亡相关蛋白的关系--《第二军医大学学报》2006年12期
低氧培养的肝癌细胞中低氧诱导因子1的表达与血管生成和细胞凋亡相关蛋白的关系
【摘要】：目的观察低氧诱导因子1α(hypoxiainduciblefactor-1α,HIF-1α)在低氧培养的肝癌细胞中的表达变化,并初步探讨其与血管生成和细胞凋亡的关系。方法将终浓度为125μmol/L的氯化钴加入HepG2肝癌细胞培养液中模拟低氧环境,并设培养不同时间(0、1、2、4、6、8h)组。(1)采用RT-PCR技术检测低氧培养不同时间的肝癌细胞中HIF-1α、VEGF、Caspase-3、bcl-2和baxmRNA的表达;(2)应用Western印迹方法及酶标免疫测量仪分别检测了各培养组细胞Caspase-3蛋白表达及Caspase-3酶活性。结果(1)HepG2细胞在低氧培养1~2h后,其HIF-1α、VEGF、bcl-2mRNA的表达逐渐增加,在4h达到高峰,随后下降,但仍高于低氧处理前水平;而baxmRNA表达无明显变化,bcl-2/bax比值与上述变化趋势一致。(2)Caspase-3mRNA及蛋白的表达及酶活性变化趋势与HIF-1α正好相反。结论HIF-1α可能通过调节VEGF、bcl-2、bax和Caspase-3的表达而抑制肝癌细胞凋亡,且这种抑制作用与缺氧程度有关。
【作者单位】：
【关键词】：
【分类号】：R735.7【正文快照】：
氧是机体新陈代谢和维持生存的必要因素,在某些生理或病理生理条件下,整体或局部低氧能引起机体出现一系列适应性反应,如红细胞生成素(erythropoietin,EPO)、血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)合成分泌增加,糖酵解途径酶的合成增加等。这些反应
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& 胸部是彰显女性魅力的一个重要部位，是女性的身体之花。每一个女性都想拥有一对饱满的胸部，不想做&太平公主&，不想被人叫&平底锅&、&飞机场&、&洗衣板&。为此, &折腾胸部&的女性越来越多，隆xiong手shu、丰胸产品也随之铺天盖地而起。可是，据不完全统计,这类女性绝大数都走了丰胸的冤枉路。面对各种各样的丰胸产品，到底该相信哪一种呢?追求美丽也不能忽视健康和生命谈及迅速容易丰胸产品，还是自己找到了&陌诗蜜尔&，是&它&让我无比&胸&猛。
总是被人调笑称为太平公主？
总是被人调笑称为太平公主？大家都知道，胸部是女人身上独特的魅力，平胸and胸小可不是件好事情，在女性自身的角度来说总是欠缺女人味，男性对于女性的审美需求来说美感不足。对于平胸的烦恼大多数女性都深有体会，胸部扁扁的无论在身材上还是在维持夫妻关系上都很有影响。在本应该是最美丽的时光里，就要拒绝平胸，就要采取有效的丰胸方法。那么要如何丰胸呢?
如何丰胸有效 衣领V深不是梦
&&& 在我们的生活当中，丰胸的方法有很多，多数方法都是需要坚持的，丰胸不是一朝一夕就可以完成的，而且需要一个良好的心态，并且丰胸要对症下药。否则难受遭罪的是你自己。所以要选好丰胸的产品是关键。
　　那么都有哪些丰胸方法呢，例如：丰胸药、丰胸霜、丰胸按摩以及一些食品也是有丰胸的效果的。要是说到效果，估计只有丰胸霜是最有效的了。既然选择了丰胸霜，在选择丰胸霜的时候必须要谨慎，必须选择到健康、安全、自然，效果好的丰胸产品，这些特点，这也是陌诗蜜尔美乳霜才能做到的。
来自法国的美乳霜&&陌诗蜜尔（Mosmier）
　　陌诗蜜尔（Mosmier）了解女性的身体特点，多年的研究，推出了陌诗蜜尔美乳霜，独创GEN美乳因子，激活乳腺的丰胸原理，开辟了乳腺二次发育的丰胸模式。从上市到现在，陌诗蜜尔丰胸产品已经被广大的消费者公认为最安全、最有效的丰胸产品，同时，在配方中特含的龙眼舌植物提取，能促进胸部的快速吸收，解决了吸收难的问题，促进形成&二次发育&模式，让丰胸不再是难题。不仅如此，陌诗蜜尔美乳霜从上市开始就推出&自然健康安全丰胸&的理念，配方全部纯天然植物萃取也兑现了&自然健康安全丰胸&的承诺。
千万用户的真实故事&&陌诗蜜尔（Mosmier）
　　我的老公是一家上市公司的总经理，我自己也是一家知名杂志社的主编，08年的时候有了个可爱的女儿，丈夫对我比结婚前还要体贴关心了，一有空就带全家到处去游玩散心，去年还去了一次夏威夷度假，我回来后到处向姐妹们炫耀，我脸上洋溢的幸福让朋友们羡慕死了。家庭和睦、生活富足、还有一个那么疼爱自己的老公，朋友们都很羡慕我，说我是世界上最幸福的女人。殊不知怎样丰胸无副作用成了我最闹心的事情。
　　我的烦恼是来自于我的胸部。165的身高，长相虽没有倾国倾城但还算秀气，皮肤白白净净的，在外人看来我的条件很不错了，因为很多人都夸过我人长的漂亮，身材又好。但是我一直有个心病那就是我的胸部又小又扁，怎样丰胸无副作用呢?因为胸小，我买的内衣全都是加厚海绵的那种，冬天不觉得什么，但夏天真的热的受不了，我想想自己真是有苦难言啊。怎样丰胸无副作用听人说吃木瓜，吃葛根粉，喝牛奶，还有大豆、猪脚、肉皮等都对丰胸有帮助。怎样丰胸无副作用呢，这些东西几乎成了我餐桌上的必备食物，可是一个月下来，我的胸部没见长腰倒是粗了一圈。丰胸不成还得辛苦的减肥，我心情沮丧到了极点。
　　后来一次与姐妹们聊天中，我道出了自己烦恼怎样丰胸无副作用，姐妹们纷纷向我推荐&陌诗蜜尔&。上网了解了一下这个产品，我觉得可以试一下，因为它的成分都是天然植物精华提取的，我就直接订.购了3个周.期。没想到一个月后，我就开始有了些变化我自己还说我的胸部的肌肤也变得光滑有弹性了，松弛下垂的现象也有所好转了。怎样丰胸无副作用，看到这些初步的效果，就继续使用，在使用完第二个周.期后，胸部变得饱满挺拔了，并且胸部的肌肤也变得饱满挺拔了也，胸部重新变的丰满、坚挺，有弹性。这让我很兴奋。
健康丰胸优势难挡&&陌诗蜜尔（Mosmier）
真正丰胸长肉
从植物体内提取的GEN再生因子配合本土科学家从天然植物中提取的有效美乳因子，能够达到激活乳房，补充乳房营养的效果。其丰胸效果是普通产品的6-8倍。发挥强大的丰胸效果，使胸部就像是气球一样慢慢丰满圆润起来，实实在在让胸部长肉。
陌诗蜜尔中的营养成分能刺激雌性荷尔蒙再生，从而使乳腺管内有结缔组织生长，令乳房增大。陌诗蜜尔（Mosmier）不仅仅是注重增大ru-fan的效果，会让增大后的美胸外观紧致，挺巧，集中，使干瘪的肌肤变得光滑水润，触感弹性十足。&
美感、质感、手感、真实感、敏感&&五感是衡量女性双峰的五个标准，Mosmier陌诗蜜尔造就完美乳房，性感坚挺、自然质感、真实手感，将你打造成&性感尤物&。
全胸美塑系统打造性感尤物&&陌诗蜜尔（Mosmier）
第一步：疏乳通络，促进营养吸收
乳腺管道贯穿着整个乳房组织，陌诗蜜尔中从法国引进的GEN再生因子，能够刺激其所需要的血液循环并将其内的垃圾清除，刺激细胞生长和雌激素分泌，加速对营养的吸收和脂肪转化能力
第二步：激活乳房，加速乳房发育
陌诗蜜尔（Mosmier）含有的其他有效活性成分，能够达到激活乳房、补充乳房营养的效果。其丰胸效果是普通产品的6-8倍。发挥强大的丰胸效果，使胸部就像是气球一样慢慢丰满圆润起来。
第三步：提拉胸部，巩固乳房形态
乳房再次进入发育后，脂肪细胞会变得活跃起来。脂肪生成也更迅速，同时身体的游离脂肪也会被快速吸收吸附到乳房，强大乳房结缔组织，使乳房变得坚挺丰满软润。
&&&& 对于陌诗蜜尔（Mosmier），用户都有哪些困扰?我们来看一下　
　1、我特别想丰胸，但不敢乱用丰胸产品怕有副作用，你们的产品真的安全吗?
　　答：你好，陌诗蜜尔，纯天然成分，无添加，无ji素，不会对人体产生任何副作用，您可以放心使用!热销上市以来，几千万用户无一例不良反应。
　　2、丰胸产品我也听说过一些，但是绝大多数都会反弹，请问这个产品会反弹吗?和普通的产品有什么不一样呢?
　　答：传统的丰胸产品之所以会反弹，是因为它们只单一地去增大腺泡，就像充气的气球一样，只是做了表面文章，气球总会是瘪下去的，因此胸部也就缩回去了。陌诗蜜尔，真正ji活乳腺细胞，让胸部开启第二次自然发育，胸部真正自己长大，所以绝对不会反弹。
　　3、您好，我想问一下，我今年21岁，属于先天性发育不良，用咱们这个产品能变大吗?
　　答：先天性胸部发育不良，主要和胸部的乳腺组织有关系，陌诗蜜尔真正抓住了胸部发育的根源，ji活乳腺细胞，让原本处于休眠状态的乳腺细胞开始产生作用，让胸部再次正常发育，所以对于先天性发育不良很有效果。
　　4、陌诗蜜尔真的可以增大到D罩杯吗?我还是有些疑虑?
　　答：有疑虑是正常的。但我们有很多的成功案例足以让您信任我们的产品。很多顾客真的是最后没想到自己能这么大，当然这也和个人的身体体质有关系，有些可能只是从B升到C，但是她们还是很满意，因为不只是大了，胸部也更有弹性了，胸型也变好，美胸应该是全方位的。
　　5、我今年40岁，胸部比较干瘪，多久能丰挺起来?
　　答：你好，确切的丰胸时间要根据您本身的情况来，每个人的胸部问题严重不同，所以丰挺起来的时间也会有略微差异，不过根据我们的经验，一般来说，使用二个月左右，即可在您胸围原有基础上增大3-4cm!
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【心灵鸡汤】
& 你觉得我单纯，那是因为你单纯。你觉得我善良，那是因为你善良。你觉得我有趣，那是因为你有趣。你觉得我天真，那是因为你天真。你单纯善良天真有趣，我怎么可能允许自己错过你。你拥有什么，才能看见什么。&&刘同}