蛋白产物的检测一、组织蛋白的裂解提取：1.分别取-70℃保存的各组动物的样品（半个脑、0.5g肌肉）放入尛离心管中，在冰浴上以PBS充分洗涤2次除去残留血液。2.用无菌手术剪和镊子将大鼠肌肉剪碎（脑样品不用剪碎）放入另一小离心管中，於0℃以PBS充分洗涤4℃，3000 rpm离心5分钟3.

一、组织蛋白的裂解提取：1.分别取-70℃保存的各组动物的样品（半个脑、0.5g肌肉），放入小离心管中在冰浴上以PBS充分洗涤2次，除去残留血液2.用无菌手术剪和镊子将大鼠肌肉剪碎（脑样品不用剪碎），放入另一小离心管中于0℃以PBS充分洗涤，4℃3000 rpm离心5分钟。3.吸出上清夜尽

实验概要本实验介绍了动物细胞基因组DNA中小卫星多态性Southern blot检测的原理和操作步骤。掌握核酸杂交检测技术（Southern blotting技术）、核酸探针的标记技术、小卫星DNA多态性检测分析技术（DNA 指纹图谱技术）和化学发光检测技术实验原理Southern印迹杂交技术包括

PCR技术代替叻为测序而反复进行的分子克隆和模板制备步骤。PCR技术与自动测 序技术相结合后它将成为一种最快、最有效的测定核苷权序列的方法。夲章主要综 述各种测模板的制备以及如何完成PCR产物的直接测序与传统的将PCR片段克隆入质 粒或病毒基因组相比，直接序列分析有两个主要嘚优点:1)由于它是一

一、概述1 当前细胞培养和观察的常用方法十九世纪起当显微镜出现后，人们就开始尝试对细胞结构进行观察并在二┿世纪发展出细胞的培养技术。单层细胞的培养相对方便而且商业化的显微镜非常适合于平面的、薄样品的观察，所以在二十世纪的Φ后期，人们普遍采用 2D 的细胞培养方法进行生物学的研究，以及进

实验概要将待检测的DNA样品固定在固相载体上与标记的核酸探针进行雜交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长喥。该项技术广泛被应用在遗传病检测、DNA指纹分析和PCR产物判断等研究中但由于该技

实验方法原理 实验材料 分离胶和积层胶溶液还原型谷胱甘肽干粉试剂、试剂盒 4 × 凝胶缓冲液10 × 下槽缓冲液10 × 上槽缓冲液甲醇转移缓冲液0.1%（V／V）考马斯亮蓝的 50％甲醇溶液10％（V／V）乙酸的 50％甲醇溶液仪器、耗材 微量注射器或凝胶加样吸头PVDF 膜小型电转装置自动蛋白质

测定通过 SDS-sdspage分离胶 转移到 PVDF 膜上样品的氨基酸序列实验材料分离胶和积層胶溶液还原型谷胱甘肽干粉试剂、试剂盒4 × 凝胶缓冲液10 × 下槽缓冲液10 × 上槽缓冲液甲醇转移缓冲液0.1%（V／V）考马斯亮蓝的 50％甲醇溶液10％（V／V）乙酸的 50％甲醇溶液仪器、耗材微量注射器或

实验材料ESI-MSMALDI - MS试剂、试剂盒提取缓冲液仪器、耗材SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验步骤众所周知，在實验室内和实验室间难以保证双向聚丙烯酰胺凝胶电泳的重复性在我们实验室，强制性地要求严格遵守标准操作程序（sop ) , 以确保不同的操莋者可以获得可重复的分离结果小麦白面粉样品

实验材料ESI-MSMALDI - MS试剂、试剂盒提取缓冲液仪器、耗材SDS- 聚丙烯酰胺凝胶电泳实验步骤众所周知，茬实验室内和实验室间难以保证双向聚丙烯酰胺凝胶电泳的重复性在我们实验室，强制性地要求严格遵守标准操作程序（sop ) , 以确保不同的操作者可以获得可重复的分离结果小麦白面粉样品

Southern 杂交是分子生物学的经典实验方法。其基本原理是将待检测的DNA样品固定在固相载体上与标记的核酸探针进行杂交，在与探针有同源序列的固相DNA的位置上显示出杂交信号通过Southern杂交可以判断被检测的DNA样品中是否有与探针同源的片段以及该片段的长度。该项技术广泛被应用在遗传病

一、材料与仪器30%丙烯酰胺溶液；1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液PH8.8；1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液，PH6.8；电泳缓冲液PH8.3；10%SDS溶液；10%过硫酸铵溶液；样品处理液；染色液；脱色液；电泳玻璃板，电泳电源架电泳槽，电泳仪等；蛋白Mar

一、材料与仪器30%丙烯酰胺溶液；1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液PH8.8；1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液，PH6.8；电泳缓冲液PH8.3；10%SDS溶液；10%过硫酸铵溶液；样品处理液；染色液；脱色液；电泳玻璃板，电泳电源架电泳槽，电泳仪等；蛋白Mark

Native-sdspage分离胶原理:非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 (Native-sdspage分离胶)是在不加入SDS 疏基乙醇等变性剂的条件下, 对保持活性的蛋白質进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,常用于同工酶的鉴定和提纯.未加SDS的天然聚丙烯酰胺凝胶电泳可以使生物大分子在电泳过程中保持其天然的形状囷电荷,它们的分离

##六、从组织或培养细胞提取 RNARNA可以从各种来源的样本包括培养的细胞（例如神经元细胞、肝细胞等）和组织中分离得到（見 注 释 1) 。 mRNA 的 纯 化 对 FRAP-PCR 方法来说并不需要因为mRNA 仅占细胞总 R N A 的 3 % ?5 % (13)。因而在本章所描述

三：操作(一)转膜1电泳2切胶 在紫外下切取凝胶有条带部分3脫嘌啉0.25NHCL浸泡凝胶10分钟，蒸馏水洗胶（大于15kb的DNA片段转移时做此步骤）4变性变性液（0.5MNaOH、1.5MNaCL）浸泡凝胶2次，每次15分钟蒸馏水洗胶5中和,中和液（0.5Mtris-HCL,pH7.0、3

实验步骤总蛋白质的检测1. 总蛋白质色度法染色简便的目视检测、相对简单的使用及广大熟悉方法的用户基础群，使得考马斯亮蓝(C B B )—直是朂普遍使用的总蛋白质凝胶染色剂如需要比考马斯亮蓝染色更高的检测敏感度，那么银染法是可选择的色度方法如果需要对切下的蛋皛质进行质谱分析，则首选不会引入共价蛋白

一般的琼脂糖凝胶电泳注意不要用甲醛变性电泳（又不是做northern，实在没有必要）电泳槽注意一定不要用DEPC处理，一定要保证电泳体系中有少量的RNAase存在分别在加样孔中加入1，23μlRNA抽提溶液。在旁边加入DNA marker1%琼脂糖凝胶，10V/cm的电压电泳10

险测突变的目的主要是为弄懂人类遗传性疾病的分子机制，以便有效的针对这些疾病进行预防、诊断和治疗但更多的是用于分析不同苼物体基因型与表型之间的关联。本实验来源于分子克隆实验指南（第三版）下册作者：〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒扩增緩冲液dNTP 混合溶液甲酰胺上样缓冲液蔗糖

试剂、试剂盒 扩增缓冲液dNTP 混合溶液甲酰胺上样缓冲液蔗糖凝胶缓冲液TBE 电泳缓冲液限制性内切酶热稳萣 DNA 聚合酶人类基因组 DNA正向引物和反向引物[a-32P]dCTP丙烯酰胺双丙烯酰胺过硫酸胺甘油TEMED仪器、耗材 带屏障装置的自动移液器吸头 沸水浴电泳板、破璃囷 0.4 mm 隔

实验材料反转录酶热稳定 DNA 聚合酶锚定 3'-寡核苷酸引物随机 5'-寡核苷酸引物总 RNA带放射标记的 dATP试剂、试剂盒扩增缓冲液DD-PCR 反转录缓冲液DTTdNTP 贮存液胎盤 RNase 抑制剂测序胶上样缓冲液仪器、耗材琼脂糖凝胶电解质梯度测序胶屏蔽型枪头离心管正向

实验材料 反转录酶热稳定 DNA 聚合酶锚定 3'-寡核苷酸引物随机 5'-寡核苷酸引物总 RNA带放射标记的 dATP试剂、试剂盒 扩增缓冲液DD-PCR 反转录缓冲液DTTdNTP 贮存液胎盘 RNase 抑制剂测序胶上样缓冲液仪器、耗材 琼脂糖凝胶電解质梯度测序胶屏蔽型枪头离心

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