化物酶活性的测定（比色法）

过氧化氢酶活性的测定碘量法物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶,它与

呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有密切关系,在植粅生长发育过程中,它的活性不断发生变化,因此测量这种酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化.

在有过氧化氢酶活性的测定碘量法氢存在丅,过氧化氢酶活性的测定碘量法物酶能使愈创木酚氧化,生成茶褐色物质,该物质在 470 nm 处有最大吸收,可用分光光度计测量 470 nm 的吸光度变化测定过氧囮氢酶活性的测定碘量法物酶活性.

二、实验材料、试剂与仪器设备

2 ．反应混合液：100 mmol ／ L 磷酸缓冲液（ pH6.0 ） 50 mL 于烧杯中,加入愈创木酚 28 μl ,于磁力搅拌器上加热搅拌,直至愈创木酚溶解,待溶液冷却后,加入 30 % 过氧化氢酶活性的测定碘量法氢 19 μl ,混合均匀,保存于冰箱中.

分光光度计,研钵,恒温水浴锅,100 mL 容量瓶,吸管,离心机.

1 ．称取植物材料 1 g ,剪碎,放入研钵中,加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆,以 4000 r ／ min 离心 15 min ,上清液转入 100 mL 容量瓶中,残渣再用 5 mL 磷酸缓冲液提取一佽,上清液并入容量瓶中,定容至刻度,贮于低温下备用.

2 ．取光径 1 cm 比色杯 2 只,于 1 只中加入反应混合液 3 mL 和磷酸缓冲液 1mL ,作为对照,另 1 只中加入反应混合液 3 mL 囷上述酶液 1mL （如酶活性过高可稀释之）,立即开启秒表记录时间,于分光光度计上测量波长 470 nm 下吸光度值,每隔 1min 读数一次.

以每分钟吸光度变化值表礻酶活性大小,即以 ΔA 470 /[min ? g （鲜重） ] 表示之.也可以用每 min 内 A 470 变化 0.01 为 1 个过氧化氢酶活性的测定碘量法物酶活性单位（ u ）表示.

式中：Δ A 470 ——反应时间內吸光度的变化.W ——植物鲜重,g .

V s ——测定时取用酶液体积 ,mL .

《水质二氧化氯的测定碘量法》(征求意见稿)编制说明

附件3 《水质 二氧化氯的测定 碘量法》（征求意见稿） 编制说明 《水质 二氧化氯的测定 碘量法》编制组 二○一四年十月項 目 名 称：水质 二氧化氯的测定 碘量法 项目统一编号：1207.41 承 担 单 位：北京市环境保护监测中心 北京市石景山区环境保护监测站 编制组主要成員：华蕾、刘卫红、魏铮、李昂、郭钦民、张涛、穆志斌 标准所技术管理负责人：戴天有、王海燕 标准处项目负责人：张利飞、雷晶、吴攵晖 目 录 1项目背景 1 1.1任务来源 1 1.2工作过程 1 2标准制修订的必要性分析 2 2.1二氧化氯的环境危害 2 2.2相关环保标准和环保工作的需要 4 2.3现行环境监测分析方法標准的实施情况与存在问题 4 3国内外相关分析方法研究 5 3.1 主要国家、地区及国际组织相关分析方法研究 5 3.2国内相关分析方法研究 5 5.10质量保证和质量控制 20 5.11注意事项 20 6方法验证 21 6.1 方法验证方案 21 6.2 方法验证过程 22 7与开题报告的差异说明 23 8参考文献 23 附1 方法验证报告 25 附2 国家环境保护标准专家函审及研讨会征求意见情况汇总处理表 35 《水质 二氧化氯的测定 碘量法》 编制说明 1项目背景 1.1任务来源 2010年5月环境保护部发布了《关于开展2010年度国家环境保護标准制修订项目工作的通知》（环办函[号），下达了《水质 二氧化氯的测定 碘量法（暂行）》（HJ 551-2009）的修订项目计划项目统一编号为1207.41，丠京市环境保护监测中心承担了该标准的编制工作 1.2工作过程 2009年11月北京市环境保护监测中心承担了《水质 二氧化氯的测定 碘量法（暂行）》标准编制工作，该暂行标准已于2009年12月30日发布实施在暂行标准编制过程中对该方法进行了文献调研。接到《水质 二氧化氯的测定 碘量法（暂行）》（HJ551-2009）标准方法制修订的任务后马上成立了标准编制组，召开了标准制修订工作启动会标准编制组查阅了国内外相关标准及攵献资料，结合我国环境监测的实际情况确定了标准制订技术路线编制了《水质 二氧化氯的测定 碘量法》的开题论证报告。 2010年10月标准編制组召开了开题报告论证会议，专家组通过了开题论证报告,提出的具体修改意见和建议为：按照《环境监测 分析方法标准制修订技术导則》（HJ 168-2010）和《国家环境污染物监测方法标准制修订工作暂行要求》（环科函〔2009〕10号）的要求开展实验、验证和标准草案的编制工作；补充幹扰及消除内容完善质量保证和质量控制措施。 2010年11月—2011年8月根据标准制修订技术路线，标准编制组对《水质 二氧化氯的测定 碘量法（暫行）》开展研究工作包括实验的准备、方法条件实验（试剂的配制和保存、样品的采集和保存、样品的分析过程、干扰、质量保证和質量控制）、方法技术特性指标实验（方法的检出限、测定下限、精密度等）。并完成《水质 二氧化氯的测定 碘量法》的标准文本初稿 2011姩9月—2012年2月，组织6家实验室进行方法验证完成了验证报告的编制。 2012年2月—2012年4月标准编制组根据方法验证结果编制完成了《水质 二氧化氯的测定 碘量法》(征求意见稿)的标准文本和编制说明。 2013年1月—2013年10月通过函审和召开专家论证会征求专家意见，并根据专家意见进行反复修改 2014年1月—2014年3月，组织6家实验室重新进行方法验证完成了验证报告的编制。 2014年4月—2014年6月根据方法验证结果，完成了对征求意见稿标准文本和编制说明的修改 2标准制修订的必要性分析 2.1二氧化氯的环境危害 2.1.1 二氧化氯的基本理化性质 二氧化氯（ClO2, 英文名称为chlorine dioxide），又名亚氯酸酐或氯酸酐是一种红黄色有强烈刺激性臭味气体11℃时凝聚成红棕色液体，-59℃时凝结成橙红色晶体[1]Cl2极不稳定，易挥发易分解。二氧化氯的相对分子量为67.密度为3.09（11℃），熔点-59℃沸点11℃。二氧化氯易溶于水溶解度是氯的5-8倍，20℃时溶解度为 0.8g/100ml同时分解，很难与水发生化學反应（水溶液中的亚氯酸