annexin v 组织上能不能考虑染组织

点击联系发帖人 时间：2017-05-19 04:29

组织上能不能考虑

从流式中文网转来的这个很详細，800转是低了点一般看离心力，300g可以试试

贴壁细胞需用0.25%的胰酶消化注意过度消化可损伤细胞。在消化时可加2％的BSA可防止消化过度如果用含EDTA的胰酶消化时，注意必须彻底清除EDTA：在标记前用1×PBS或1×bindingbuffer洗涤清除EDTA，以免残余的EDTA与Ca2＋螯合影响Annexin V的结合。
（2）细胞收集悬浮细胞收集：离心5分钟；贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化收集后（注：胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与Annexin V-FITC的结合）于室温2000rpm离心5～10分钟，收集细胞；
（3）细胞洗涤：用预冷1×PBS（4℃）重悬细胞一次2000rpm离心5～10分钟，洗涤细胞；
（6）PI标记：上机前5分钟再加入5μL的PI染色

（1）本试剂只适用于实验，不适用于临床检测；
（2）PI（propidium iodide碘化丙锭）有毒性，能通过皮肤吸收对眼睛有刺激作用，使用时需戴手套；
（3）Annexin V-FITC和PI是光敏物质在操作时请注意避光。在处理和标记时尽可能在暗处进行。在孵育阶段用铝箔包裹容器或置于抽屉中。细胞標记后在暗室内用显微镜观察；
（4）整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞尽量在4℃下操作，以免影响细胞状态
（5）在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净以免PBS残留，有可能会影响实验结果
（6）为防止荧光衰变，宜在1小时内进行流式检测
（7）PI染色時间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC染色最短可在上机前5分钟再加入PI染色。、

政治敏感、违法虚假信息

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这个帖子发布于8年零237天前其中嘚信息可能已发生改变或有所发展。

请大家帮我分析一下这个Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡的结果试剂盒用的是Invitrogen公司的V13241，是贴壁的细胞用糖刺激了72尛时检测凋亡的情况散点图如下，麻烦各位看看这个结果为什么分群不明显？是不是因为我加的AnnexinV的量不够呢非常、非常、非常感谢！

不知道邀请谁？试试他们

政治敏感、违法虚假信息

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做Annexin V及PI染色不能够固定细胞因为凅定的实验操作实际上会杀死细胞，所以不能够用于关于细胞调亡的检测

经过固定的细胞，将会对Annexin V和PI同时呈现强染色给zhidao你假阳性结果。

所以你的时间点多也回只好辛苦一点了只有在每个时间点用活细胞染色，并且染色后一个小时内一定要检测记录好实验结果不然时間拉长，细胞离开培养皿后逐渐调亡染色会逐渐增强，还是给你假阳性

为了比较多个时间点，在分批操作上得多费心保持步骤和时间嘚一致了为了保险，最好给每个时间点设置一答个对照组

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