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TLC检查双氢青蒿素中的有关物质
目的建立一种新的薄层色谱方法检查双氢青蒿素中的有关物质.方法使用硅胶G薄层板,以1,2-二氯乙烷-乙醚(80:20)为展开剂,5%香草醛硫酸溶液为显色剂.结果和结论新建立的方法能有效地分离并检测双氢青蒿素中的有关物质,分离效果好、灵敏度高,可应用于双氢青蒿素中有关物质的检查.
CAI Jin-jin
CHAO Ruo-bing
作者单位：
四川大学华西药学院,四川,成都,610041
年，卷(期)：
机标分类号：
在线出版日期：
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万方数据电子出版社②CHCl3层碱水层；③中和、酸化结晶⑴A，大黄酸；B，大黄素；C，芦；⑵各化合物的酸性有强到弱顺序：A&B&gt；④2、波谱综合解析题；⑴某化合物橙红色针晶，具有升华性，分子量254，；UVλmaxnm（lgε）：225（4.37），；H-NMR（CDCl3）δ：2.41（3H，br；MSm/z：254，226，198；综合所给条件，解析出该化合物结
③中和、酸化
结晶 ⑴ A，大黄酸；B，大黄素；C，芦荟大黄素；D，大黄素甲醚。
⑵ 各化合物的酸性有强到弱顺序：A&B&CD，即大黄酸最强，因为具有羧基；大黄素第二，因为具有β-酚羟基；其余两个化合物酸性相近，均较弱，因都只具有2个α-酚羟基。 ⑶ ① A；② B；③ D；④ C。
④ 2、波谱综合解析题
⑴ 某化合物橙红色针晶，具有升华性，分子量254，分子式为C15H10O4；与10%NaOH溶液反应呈红色；波谱数据如下。
UV λmaxnm（lgε）：225（4.37），256（4.33），279（4.01），356（4.07），432（4.08）。 IR γmaxcm-1：，1621。 1
H-NMR（CDCl3） δ：2.41（3H，br，s，W1/2=2.1Hz）；6.98（1H，br，s，W1/2=4.0Hz）；7.23（1H，d，J=8.5Hz）；7.30（1H，br，s，W1/2=4.0Hz）；7.75（1H，d，J=8.5Hz）；7.51（1H，m）。
MS m/z：254，226，198。
综合所给条件，解析出该化合物结构式（要求解析全部有用的条件和数据）。
由化合物颜色及显色反应确定该化合物为蒽醌类化合物。由分子式确定其为游离蒽醌。
升华性，碱液反应呈红色，均为羟基蒽醌类的典型性质；Mp：196～196.5℃ ，符合一般蒽醌类化合物沸点较高的特点。
分子式：C15H10O4，蒽醌类的母核由14个C组成，可能母核上还连有一个甲基。
UV：第V峰为432 nm，可知有2个α-OH；第III峰的lgε值为4.01，示无β-OH。
IR：根据游离羰基（1675 cm-1）及缔合羰基（1621 cm-1）频率差为54，推知其可能存在1，8-二羰基。
H-NMR：7.75（1H，d，J = 8.5 Hz）、7.51（1H，m）、7.23（1H，d，J = 8.5 Hz）分别为左侧芳环C-5、C-6、C-7上质子，C-5质子处于低场；7.30（1H，br，s，W1/2 = 4.0 Hz）、6.98（1H，br，s，W1/2 = 4.0 Hz）为另一侧芳环的2个质子，由二者为宽峰、W1/2 = 4.0 Hz可知二者为间位偶合，同时与2.41（3H，br，s，W1/2 = 2.1 Hz）的甲基峰产生烯丙偶合，证明二者互与此甲基处于邻位碳上。
综上，该化合物应为大黄酚，化学结构如下：
MS裂解峰解析如下：
⑵ 1,5-二羟基-2-甲氧基-9,10-蒽醌的结构鉴定。
第五章 黄酮类化合物
一、填空题
1、黄酮类化合物主要指基本母核为连接而成的一系列化合物。
2酮醇类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类、查耳酮类、异黄酮类、花色素类和黄烷类、橙酮类等
3、花色素类是一类主要存在于植物花、果和叶子中的水溶性很强的色素，并且其颜色随着水溶液值的改变而改变，pH & 7时呈红色，pH 8.5时呈紫色，pH & 8.5时则呈蓝色。
4氢键缔合而产生的。
5、分离黄酮苷
元时的原理是吸附作用，酚羟基数目多的物质难洗脱。 6、用紫外色谱法鉴别羟基黄酮类化合物时，两者的带Ⅱ均出现在220 ~ 280 nm范围内，而带Ⅰ则受C3位 OH的有无影响，一般黄酮类带Ⅰ在A环上羟基数增加时，主要影响带Ⅱ红移，当B环上羟基数增加时，主要影响带 Ⅰ红移。
7、黄酮类化合物结构中经常有OCH3与葡萄糖或鼠李糖等同时出现，一般其NMR谱峰中的化学位移均在3.5左右，但峰形不一样，前者为单一尖锐峰，后者为多重峰。 二、简答题
1、写出下列化合物的结构式，指出其结构类型。
⑷ 香叶木素 ⑴ 山柰酚（kaempferol）， 黄酮醇类（flavonol）
⑵ 槲皮素（quercetin）,黄酮醇类（flavonol）
⑶ 杨梅素 (myricetin)，黄酮醇类（flavonol）
⑷ 芦丁（rutin）， 黄酮醇类（flavonol）
2、判断下列各组化合物的Rf值大小或在色谱柱上的流出顺序。
⑴ 下列化合物进行硅胶薄层层析，以甲苯-氯仿-丙酮（8:5:5）展开，判断其Rf值大小：
A、芹菜素 （5,7,4’-三羟基黄酮） B、山奈酚
(3,5,7,4’-四羟基黄酮) C、槲皮素 （3,5,7,3’,4’-五羟基黄酮） D、桑色素 （3,5,7,2’,4’-无羟基黄酮）
E、高良姜素 （3,5,7-三羟基黄酮）
答： E&A&B&C&D
⑵ 下列化合物进行纸层析，以BAW系统（4:1:5,上层）展开，判断其Rf值大小：
A、木犀草素 （5,7,3’,4’-四羟基黄酮）
B、刺槐素 （5,7-二羟基， 4’-甲氧基黄酮） C、槲皮素 D、芹菜素
E、槲皮苷 (槲皮素-3-O-鼠李糖苷)
F、.芦丁（槲皮素-3-O-芸香糖苷）
答： B&D&A&C&E&F
⑶ 下列化合物进行纸层析，以5%乙酸水溶液展开，判断其Rf值大小：
A、槲皮素 B、二氢槲皮素
C、异槲皮苷（槲皮素-3-O-葡萄糖苷）
答: D&C&B&A
⑷ 下列化合物进行聚酰胺柱色谱分离，以含水乙醇梯度洗脱，判断其洗脱顺序：
答：F&E&D&A&C&B
⑸ 用Sephadex LH-20柱色谱分离下列化合物，以甲醇洗脱，判断其洗脱顺序： A、槲皮素-3-芸香糖苷
B、山奈酚-3-半乳糖鼠李糖-7-鼠李糖苷 C、槲皮素-3-鼠李糖苷 D、槲皮素 E、芹菜素 F、木犀草素
G、杨梅素（5,7,3’,4’,5’-五羟基黄酮醇）
答： B&A&C&E&F&D&G
3、化学法或色谱法检别下列各组化合物，并写出反应名称、试剂、条件和结果。 ⑴ 化学法和UV法分别鉴别：
答： 化学法：Molish反应：先用适量醇类溶剂分别溶解两个成分（于两个试管中），分别加入α-萘酚试剂，摇匀，在分别沿管壁慢慢加入浓硫酸（不能摇），结果观察：两液交界面出现紫红色环的样品为芦丁（含糖结构的苷类），无紫红色环的样品为槲皮素（不含糖结构的苷元）。
色谱法：两化合物均出现两个吸收峰，但槲皮素λmax的带Ⅰ出现在长波长方向的374 nm处，而芦丁由于C3为糖基的引入，其带Ⅰ相对出现在较短波长方向，λmax在359 nm处。
⑵ 化学法：大豆素（7,4’-二羟基异黄酮），芹菜素（5,7,4’-三羟基黄酮），芹菜素-7-葡萄糖苷 4、用溶剂法和色谱法两种方法，分别分离下列各组化合物，并写出必要条件和相应结果
大豆素，芹菜素，槲皮素
5. 香叶木素是非常典型的黄酮类化合物，其化合物名称为5,7,3’-三OH-4’-OCH3-黄酮，请回答下列问题：
⑴ 写出其化学结构，并写出其基本母核的编号。
⑵ 选择什么溶剂可以从其原药材中提取出来？写出简单提取流程。 ⑶ 选择一个合适的显色剂，可以作为TLC检查时有明显显色效果。 ⑷ 简述其氢核磁共振谱特征（化学位移，偶核裂变，H原子数等），并在其结构上予以定位。
6. 用pH梯度萃取法分离黄酮类化合物时，如何根据化合物的酸性强弱来选择合适的萃取溶液？（列出常用的萃取试液，并注明所能萃取的对应化合物情况）
三、综合提取分离题
1、设计从槐米中提取芦丁的工艺流程，说明提取原理、注意点和实验条件。 答：从槐米中提取芦丁的一般流程和条件： 槐米粗粉
加水及硼砂，煮沸，加石灰乳调
pH 8-9，微沸20-30min，滤过 提取液
加HCl调pH4~5，静置，滤过
热水或乙醇重结晶
提取纯化原理：芦丁分子结构中具有较多酚羟基，呈弱酸性（类似于羧酸），易溶于碱液中；又因芦丁在冷水中溶解度小（1∶10000），在酸化后的酸水中溶解度更小，继而可沉淀析出，因此，可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
2、现有某天然药物含有挥发油（A）、多糖（B）、皂苷（C）、芦丁（D）、槲皮素（E）等化学成分，
请回答下列问题：
⑴ 现需单独提取A成分，问选用什么方法和条件？写出简单过程。 答：水蒸气蒸馏，得到蒸馏液，
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天然黄酮香叶木素类及其衍生物的合成与生物活性研究
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天然黄酮香叶木素类及其衍生物的合成与生物活性研究
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3秒自动关闭窗口②CHCl3层碱水层；③中和、酸化结晶⑴A，大黄酸；B，大黄素；C，芦；⑵各化合物的酸性有强到弱顺序：A&B&gt；④2、波谱综合解析题；⑴某化合物橙红色针晶，具有升华性，分子量254，；UVλmaxnm（lgε）：225（4.37），；H-NMR（CDCl3）δ：2.41（3H，br；MSm/z：254，226，198；综合所给条件，解析出该化合物结
③中和、酸化
结晶 ⑴ A，大黄酸；B，大黄素；C，芦荟大黄素；D，大黄素甲醚。
⑵ 各化合物的酸性有强到弱顺序：A&B&CD，即大黄酸最强，因为具有羧基；大黄素第二，因为具有β-酚羟基；其余两个化合物酸性相近，均较弱，因都只具有2个α-酚羟基。 ⑶ ① A；② B；③ D；④ C。
④ 2、波谱综合解析题
⑴ 某化合物橙红色针晶，具有升华性，分子量254，分子式为C15H10O4；与10%NaOH溶液反应呈红色；波谱数据如下。
UV λmaxnm（lgε）：225（4.37），256（4.33），279（4.01），356（4.07），432（4.08）。 IR γmaxcm-1：，1621。 1
H-NMR（CDCl3） δ：2.41（3H，br，s，W1/2=2.1Hz）；6.98（1H，br，s，W1/2=4.0Hz）；7.23（1H，d，J=8.5Hz）；7.30（1H，br，s，W1/2=4.0Hz）；7.75（1H，d，J=8.5Hz）；7.51（1H，m）。
MS m/z：254，226，198。
综合所给条件，解析出该化合物结构式（要求解析全部有用的条件和数据）。
由化合物颜色及显色反应确定该化合物为蒽醌类化合物。由分子式确定其为游离蒽醌。
升华性，碱液反应呈红色，均为羟基蒽醌类的典型性质；Mp：196～196.5℃ ，符合一般蒽醌类化合物沸点较高的特点。
分子式：C15H10O4，蒽醌类的母核由14个C组成，可能母核上还连有一个甲基。
UV：第V峰为432 nm，可知有2个α-OH；第III峰的lgε值为4.01，示无β-OH。
IR：根据游离羰基（1675 cm-1）及缔合羰基（1621 cm-1）频率差为54，推知其可能存在1，8-二羰基。
H-NMR：7.75（1H，d，J = 8.5 Hz）、7.51（1H，m）、7.23（1H，d，J = 8.5 Hz）分别为左侧芳环C-5、C-6、C-7上质子，C-5质子处于低场；7.30（1H，br，s，W1/2 = 4.0 Hz）、6.98（1H，br，s，W1/2 = 4.0 Hz）为另一侧芳环的2个质子，由二者为宽峰、W1/2 = 4.0 Hz可知二者为间位偶合，同时与2.41（3H，br，s，W1/2 = 2.1 Hz）的甲基峰产生烯丙偶合，证明二者互与此甲基处于邻位碳上。
综上，该化合物应为大黄酚，化学结构如下：
MS裂解峰解析如下：
⑵ 1,5-二羟基-2-甲氧基-9,10-蒽醌的结构鉴定。
第五章 黄酮类化合物
一、填空题
1、黄酮类化合物主要指基本母核为连接而成的一系列化合物。
2酮醇类、二氢黄酮类、二氢黄酮醇类、查耳酮类、异黄酮类、花色素类和黄烷类、橙酮类等
3、花色素类是一类主要存在于植物花、果和叶子中的水溶性很强的色素，并且其颜色随着水溶液值的改变而改变，pH & 7时呈红色，pH 8.5时呈紫色，pH & 8.5时则呈蓝色。
4氢键缔合而产生的。
5、分离黄酮苷
元时的原理是吸附作用，酚羟基数目多的物质难洗脱。 6、用紫外色谱法鉴别羟基黄酮类化合物时，两者的带Ⅱ均出现在220 ~ 280 nm范围内，而带Ⅰ则受C3位 OH的有无影响，一般黄酮类带Ⅰ在A环上羟基数增加时，主要影响带Ⅱ红移，当B环上羟基数增加时，主要影响带 Ⅰ红移。
7、黄酮类化合物结构中经常有OCH3与葡萄糖或鼠李糖等同时出现，一般其NMR谱峰中的化学位移均在3.5左右，但峰形不一样，前者为单一尖锐峰，后者为多重峰。 二、简答题
1、写出下列化合物的结构式，指出其结构类型。
⑷ 香叶木素 ⑴ 山柰酚（kaempferol）， 黄酮醇类（flavonol）
⑵ 槲皮素（quercetin）,黄酮醇类（flavonol）
⑶ 杨梅素 (myricetin)，黄酮醇类（flavonol）
⑷ 芦丁（rutin）， 黄酮醇类（flavonol）
2、判断下列各组化合物的Rf值大小或在色谱柱上的流出顺序。
⑴ 下列化合物进行硅胶薄层层析，以甲苯-氯仿-丙酮（8:5:5）展开，判断其Rf值大小：
A、芹菜素 （5,7,4’-三羟基黄酮） B、山奈酚
(3,5,7,4’-四羟基黄酮) C、槲皮素 （3,5,7,3’,4’-五羟基黄酮） D、桑色素 （3,5,7,2’,4’-无羟基黄酮）
E、高良姜素 （3,5,7-三羟基黄酮）
答： E&A&B&C&D
⑵ 下列化合物进行纸层析，以BAW系统（4:1:5,上层）展开，判断其Rf值大小：
A、木犀草素 （5,7,3’,4’-四羟基黄酮）
B、刺槐素 （5,7-二羟基， 4’-甲氧基黄酮） C、槲皮素 D、芹菜素
E、槲皮苷 (槲皮素-3-O-鼠李糖苷)
F、.芦丁（槲皮素-3-O-芸香糖苷）
答： B&D&A&C&E&F
⑶ 下列化合物进行纸层析，以5%乙酸水溶液展开，判断其Rf值大小：
A、槲皮素 B、二氢槲皮素
C、异槲皮苷（槲皮素-3-O-葡萄糖苷）
答: D&C&B&A
⑷ 下列化合物进行聚酰胺柱色谱分离，以含水乙醇梯度洗脱，判断其洗脱顺序：
答：F&E&D&A&C&B
⑸ 用Sephadex LH-20柱色谱分离下列化合物，以甲醇洗脱，判断其洗脱顺序： A、槲皮素-3-芸香糖苷
B、山奈酚-3-半乳糖鼠李糖-7-鼠李糖苷 C、槲皮素-3-鼠李糖苷 D、槲皮素 E、芹菜素 F、木犀草素
G、杨梅素（5,7,3’,4’,5’-五羟基黄酮醇）
答： B&A&C&E&F&D&G
3、化学法或色谱法检别下列各组化合物，并写出反应名称、试剂、条件和结果。 ⑴ 化学法和UV法分别鉴别：
答： 化学法：Molish反应：先用适量醇类溶剂分别溶解两个成分（于两个试管中），分别加入α-萘酚试剂，摇匀，在分别沿管壁慢慢加入浓硫酸（不能摇），结果观察：两液交界面出现紫红色环的样品为芦丁（含糖结构的苷类），无紫红色环的样品为槲皮素（不含糖结构的苷元）。
色谱法：两化合物均出现两个吸收峰，但槲皮素λmax的带Ⅰ出现在长波长方向的374 nm处，而芦丁由于C3为糖基的引入，其带Ⅰ相对出现在较短波长方向，λmax在359 nm处。
⑵ 化学法：大豆素（7,4’-二羟基异黄酮），芹菜素（5,7,4’-三羟基黄酮），芹菜素-7-葡萄糖苷 4、用溶剂法和色谱法两种方法，分别分离下列各组化合物，并写出必要条件和相应结果
大豆素，芹菜素，槲皮素
5. 香叶木素是非常典型的黄酮类化合物，其化合物名称为5,7,3’-三OH-4’-OCH3-黄酮，请回答下列问题：
⑴ 写出其化学结构，并写出其基本母核的编号。
⑵ 选择什么溶剂可以从其原药材中提取出来？写出简单提取流程。 ⑶ 选择一个合适的显色剂，可以作为TLC检查时有明显显色效果。 ⑷ 简述其氢核磁共振谱特征（化学位移，偶核裂变，H原子数等），并在其结构上予以定位。
6. 用pH梯度萃取法分离黄酮类化合物时，如何根据化合物的酸性强弱来选择合适的萃取溶液？（列出常用的萃取试液，并注明所能萃取的对应化合物情况）
三、综合提取分离题
1、设计从槐米中提取芦丁的工艺流程，说明提取原理、注意点和实验条件。 答：从槐米中提取芦丁的一般流程和条件： 槐米粗粉
加水及硼砂，煮沸，加石灰乳调
pH 8-9，微沸20-30min，滤过 提取液
加HCl调pH4~5，静置，滤过
热水或乙醇重结晶
提取纯化原理：芦丁分子结构中具有较多酚羟基，呈弱酸性（类似于羧酸），易溶于碱液中；又因芦丁在冷水中溶解度小（1∶10000），在酸化后的酸水中溶解度更小，继而可沉淀析出，因此，可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
2、现有某天然药物含有挥发油（A）、多糖（B）、皂苷（C）、芦丁（D）、槲皮素（E）等化学成分，
请回答下列问题：
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香叶木素保护视网膜损伤的作用研究
【摘要】：研究背景：视网膜损伤可引起患者视力的急剧下降和视野缺损使患者生活质量明显下降,已是全球公共健康问题。目前用于临床治疗视网膜损伤的药物很少,亟需寻找新的候选药物。传统的眼科用药一般是由抗炎,抗菌和抗过敏成分组成,如抗生素,糖皮质激素等,对视网膜损伤疗效不佳。同时,这些药物副作用较大,病人无法长期使用。菊花是我国传统的常用中药材之一,易获取,副作用少,长期应用较为安全。菊花以它的清肝明目作用而出名,大量的研究证实菊花对多种眼病具有治疗作用,包括年龄相关的视网膜黄斑退变,视网膜血管动脉粥样硬化,糖尿病眼病以及一些药物相关的视网膜毒性损伤等。然而菊花治疗眼科疾病的物质基础未明,且鲜有关于菊花眼部保护作用的具体机制研究。基于此,我们基于前期成分和功效的发现,开展了菊花提取物香叶木素对抗视网膜损伤的作用及相关机制研究。一.研究方法：1.选用人视网膜色素上皮ARPE-19细胞为研究对象,用ADR构建视网膜梯度损伤的细胞模型,通过MTT法筛选评价香叶木素对视网膜的保护作用。选用Sprague-Dawley (SD)雄性大鼠为研究对象,用30-gauge针头的汉密尔顿氏微量注射器从右眼的颞部注射5μl阿霉素(ADR),至玻璃体内,左眼注射同样体积的溶剂作为对照组。大鼠连续注射五天后安乐死,手术切除眼球,用10%的福尔马林溶液固定。固定好的眼球在睫状体扁平部区域做石蜡切片备用,构建视网膜损伤动物模型,考察香叶木素对视网膜损伤的保护作用。2.选用ADR造模的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)为研究对象,经过香叶木素处理后,通过光学显微镜、DAPI染色结合荧光显微镜、Annexin V/PI染色结合流式细胞术检测香叶木素对ADR引起视网膜细胞凋亡的影响,并采用Western-blot技术检测ADR诱导的ARPE-19细胞凋亡相关通路的变化情况。用ADR对SD雄性大鼠造模,用香叶木素处理后,采用HE染色结合光学显微镜,TUNEL结合荧光显微镜等方法,检测香叶木素对ADR引起视大鼠网膜细胞凋亡的影响,并采用Western-blot技术检测凋亡相关通路的变化情况。3.选用ADR造模的ARPE-19细胞为研究对象,经过香叶木素处理后,通过γ-H2AX染色结合免疫荧光显微镜检测香叶木素对ADR引起视网膜细胞DNA损伤的影响,并采用Western-blot技术检测DNA损伤相关通路的变化情况。选用ADR造模的SD雄性大鼠,经过香叶木素处理后,采用Western-blot技术检测视网膜中DNA损伤相关通路的变化情况。4.选用ADR造模的ARPE-19细胞为研究对象,经过香叶木素处理后,通过H2DCFDA染色结合流式细胞术、GSH酶循环法检测香叶木素对ADR引起视网膜细胞氧化应激的影响。并通过JC-1染色结合免疫荧光显微镜检测香叶木素对ADR引起视网膜细胞线粒体功能的影响,并采用Western-blot技术检测线粒体功能相关蛋白的变化情况。二.研究结果：1.香叶木素可保护ADR诱导产生的视网膜细胞损伤。在ADR构建的视网膜梯度损伤细胞模型上,香叶木素可以有效地减少ADR介导的人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)的增殖抑制作用,即使在高浓度的ADR作用下,香叶木素仍然发挥有效的保护作用。在ADR构建的视网膜损伤的大鼠模型上,视网膜组织切片显示香叶木素可以显著地抑制ADR引起的视网膜色素上皮细胞的萎缩与变性,并减少大面积的脱离。2,香叶木素可减少ADR诱导的视网膜色素上皮细胞的凋亡。在ADR构建的视网膜损伤细胞模型上,DAPI染色显示香叶木素可以有效地减少ADR诱导的视网膜色素上皮细胞的凋亡小体的出现；Annexin V/PI染色结合流式细胞术表明香叶木素能减少ADR引起细胞的凋亡；Western-blot结果表明香叶木素可明显逆转由ADR引起的凋亡相关信号cleaved caspase-3和PARP的切割。在ADR构建的视网膜损伤的体内模型上,视网膜组织切片TUNEL也显示香叶木素可以有效地减少ADR引起的大鼠视网膜细胞凋亡,Western-blot结果表明香叶木素可以明显逆转由ADR引起的大鼠视网膜细胞PARP蛋白的切割。3.香叶木素可抑制视网膜色素上皮细胞内ADR诱导的DNA损伤在ADR构建的视网膜损伤细胞模型上,γ-H2AX染色结果表明香叶木素能减少视网膜色素上皮细胞的DNA损伤,并且Western-blot结果显示进一步佐证香叶木素可以逆转由ADR引起的DNA损伤标志物γ-H2AX和p53的高表达。在ADR构建的视网膜损伤的体内模型上,视网膜组织Western-blot结果显示香叶木素可以有效地减少ADR引起的大鼠视网膜细胞γ-H2AX高表达。4.香叶木素可抑制视网膜色素细胞内ADR诱导的氧化应激和线粒体损伤在ADR构建的人视网膜细胞损伤模型上,H2DCFDA染色结合流式细胞术、GSH酶循环法结果表明香叶木素能减少ARPE-19细胞的ROS水平,增加细胞内GDH水平。JC-1染色结合免疫荧光显微镜结果表明香叶木素能减少ARPE-19细胞的线粒体损伤。Western-blot结果表明香叶木素可以明显逆转由ADR引起的视网膜细胞Bcl-2蛋白的低表达。由此可见,香叶木素可以有效地减少ADR对于视网膜色素上皮ARPE-19细胞的氧化应激反应和线粒体损伤。三.研究结论：综上所述,本论文证实香叶木素通过减少DNA的损伤与降低视网膜色素上皮细胞氧化应激所致的凋亡而起到对视力的保护作用。因此,本文为香叶木素作为眼科视网膜损伤保护用药提供科学依据。
【关键词】：
【学位授予单位】：浙江大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2016【分类号】：R285【目录】：
致谢4-5中文摘要5-9英文摘要9-12缩略词表12-151 前言15-192 实验材料19-23 2.1 药物和化合物19 2.2 实验仪器19-20 2.3 实验试剂20-21 2.4 Western-bolt相关试剂的配置21-233 实验方法23-29 3.1 实验动物及分组23 3.2 组织病理分析23 3.3 TUNEL法分析23 3.4 Western bolt法分析23-25 3.5 细胞培养25 3.6 细胞存活实验25 3.7 流式细胞术检测细胞凋亡25-26 3.8 DAPI染色分析26 3.9 胞内ROS检测26 3.10 胞内GSH检测26-27 3.11 线粒体膜电位(Ψm)检测27 3.12 免疫荧光分析27-28 3.13 统计学分析28-294 实验结果29-41 4.1 香叶木素可以保护ADR诱导产生的视网膜细胞损伤29-31 4.2 香叶木素对抗ADR诱导的视网膜色素上皮细胞的凋亡31-34 4.3 香叶木素可以抑制视网膜色素上皮细胞内ADR诱导的DNA损34-37 4.4 香叶木素可抑制视网膜色素上皮细胞内ADR诱导的氧化应激和线粒体损伤37-415 实验讨论41-44参考文献44-51综述51-61 参考文献57-61作者简历及在学期间发表论文61
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