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细胞转染技巧你知道多少？
影响转染效率因素主要有三个，细胞种类（状态）、质粒以及转染试剂。为了得到一个好的转染结果，我们要像下面这样做。转染前1、转染前细胞的状态和密度都非常影响转染效率和后期的实验结果。转染时细胞的密度为50%-80%较好，同时注意在转染后收细胞时的密度不要过高。比如转染质粒到细胞内，48小时后做WB，那么此时细胞的密度最好不要长满. 因为细胞长的过高严重影响细胞的状态（周期进程阻滞，凋亡增加等）从而影响实验结果。一般为前一天下午铺板，第二天上午进行转染，48小时后收细胞进行功能检测。2、不同的质粒和脂质体最佳搭配比例不同，转染前，应该摸一个最佳配比。可以按照质粒：脂质体=1：1， 1：1.5， 1：2， 1：2.5， 1：3， 1：3.5的梯度比例来检测最佳转染比例。3、支原体污染会严重影响细胞转染的效率，且支原体污染不会像细菌污染那么明显可见，转染前可以用环丙沙星杀一杀支原体。转染时转染时1、转染时，要小心轻柔的将lipo2000加到培养基中并轻轻混匀（说明书上的用词为：Mix gently），避免粗暴用力吹打，会导致脂质体失效。2、转染时各种培养皿添加的质粒和脂质体参考量对查看相对应的表！转染后1、现在大多数转染试剂可以使用带血清的培养基进行转染，转染后6小时更换培养基，一是lipo2000具有一定毒性，二是培养基需要更换成有血清培养基。2、转染后效率的检测：（1）观察转染后细胞荧光情况（2）qPCR验证。（3）WB检测敲减或者过表达蛋白。3、转染后发现转染效率不高，可以通过两种方法：（1）复转染，即转染后12-24小时再次进行转染，前提是该细胞对脂质体的耐受性较好，转染后细胞死亡数较少。（2）通过药筛来杀死未转入成功的细胞。前提是该质粒带有抗生素抗性的基因。
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4月3日，国家兴奋剂检测上海实验室(以下简称上海实验室)共建协议签约仪式在沪举行。国家转染的时候质粒浓度太大用什么稀释_百度知道
转染的时候质粒浓度太大用什么稀释
我有更好的答案
你质粒用什么溶解的就用什么稀释呀
采纳率：44%
来自团队：
你好 请问一些你是用什么试剂盒提的质粒 用多少洗脱液洗脱的？我是大提质粒之后浓度总是很低，质粒浓缩效果也不理想
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质粒大提+转染试剂=完美组合
来源:生物谷
浏览人数: 3405
质粒大提试剂盒产品特点：
& 每次提100-150ml菌，一般能提质粒700-800ug，高丰度质粒能提1-2mg
& 50ml菌液，所有buffer用量可减半，可提40次，相当于中提
& OD260/ 280在1.9左右
& 去除内毒素，可用于转染及动物体内实验，更可用于高效转化植物原生质体实验，植物转染率高达90%以上
& 不用过柱子，纯化过程在小离心机上进行，操作方便
& 10kb-100kb以上大型及超大质粒都能提取
提出质粒量大，纯度高，内毒素去除完全，可提10kb以上大质粒（过柱子的质粒超过10kb就会断裂），操作方便，价格低
高效真核转染试剂VigoFect产品特点：
& 非脂质体阳离子类，比脂质体类转染试剂毒性低
& 操作简单，转染过程用全培养基
& 带血清会使细胞状态好，双抗不影响转染效率
& 转染范围广，大多数细胞都有较高的转染效率
如293转染效率达80-90%，Cos7,Hela,MCF7,A549,HepG2,CHO等常用细胞的转染效率可达50%以上，NIH3T3 30-50%。HepG2，NIH3T3比Lipofectmine 2000效率高
& 用生理盐水稀释转染试剂VigoFect
& 可以转SiRNA
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联系人：高
电话：010-
传真：010－什么是转染？为什么要质粒转染？_百度知道
什么是转染？为什么要质粒转染？
指真核细胞由于外源DNA掺入而获得新的遗传标志的过程。常规转染技术可分为瞬时转染和稳定转染（永久转染）两大类。转染目的转染(transfection)。 转染一般是将目的基因构建到某个载体，将构建好的重组质粒导入细胞中：研究你的目的片段到细胞内的表达
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