猪细环病毒2型（TTSuV2）ORF1主要优势抗原表位区的原核表达及间接阻断ELISA方法的建立
猪细环病毒(Torque teno suis virus, TTSuV)是一种无囊膜、呈单股环状的球形负链DNA病毒,包括TTSuV1和TTSuV2两种基因型。2002年,TTSuV首次在猪体内检测出来,随后,世界各国相继报道了TTSuV感染。目前还没有证据表明TTSuV能够直接引起临床疾病,但该病毒可能与PRRSV、PCV2等病原存在协同致病作用,常以混合感染情况出现。在患有断奶仔猪多系统衰竭综合征的猪群中,TTSuV的阳性率要明显高于健康猪群,且TTSuV2与PCV2等病毒混合感染阳性率要高于TTSuV1与PCV2等病毒混合感染。TTSuV可以在多种细胞中生长,普遍存在于各种传代细胞系中,但该病毒的分离鉴定还未成功。有关TTSuV的研究主要集中于其流行病学调查。在我国,大部分地区都存在TTSuV感染,因此做好TTSuV的流行病学的监控十分重要。ORF1表达TTSuV2的主要衣壳蛋白,具有良好的抗原性,能够诱导机体产生相应抗体&
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输血型传播病毒(Torque Teno virus,TTV)是由Nishizawa[1]于1997年在研究原因不明肝炎患者的过程中,用RDA(代表性差异技术)方法从一名58岁的日本患者血液中分离到的一种病毒,是继甲、乙、丙、丁、戊、己、庚之后的又一肝炎病毒--辛型肝炎病毒,从属与指环病毒科(Anellovirida)。该病毒为单股环状DNA,病毒基因组长度在2.1-3.9 KB之间,有两个主要的开放阅读框(ORF),ORF1可能编码病毒的主要结构蛋白,ORF2主要编码非结构蛋白。TTV能感染人、非人灵长类、猪、犬、猫、牛、羊、骆驼等哺乳动物,对禽类的感染也有报道,但是,TTV的大小及特性在不同物种中差异较大,仅人的TTV就存在40多个基因型。TTV感染范围较宽,传播途径较广,与人类隐性肝病密切相关,因此引起了世界各国学者的广泛关注。本试验根据GeneBank公开发表的SAa-10(AB060594)全序列设计型特异性引物,通过巢...&
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大环内酯类抗生素是一类常见的自然产物,具有抗菌抑菌的活性。它们通常是由放线菌、小单孢菌和糖多孢菌产生的。由生二素链霉菌(Streptomy-ces ambofaciens)产生的螺旋霉素,具有一个16元聚酮内酯环[1],由Ⅰ型聚酮合酶(PKSⅠ)合成。16元环上有3个脱氧己糖,分别是福洛氨糖、碳霉氨糖和碳霉糖[2]。螺旋霉素属中谱抗生素,其抗菌谱与红霉素相似,但抗生素后效应较红霉素持续时间更长,且不良反应明显低于红霉素。到目前为止,螺旋霉素在临床应用中仍然有着重要的价值。螺旋霉素生物合成基因簇的大小在92 kb左右[3]。1990年Richardson等人[4]发现螺旋霉素生物合成基因中的抗性基因orf11c。1992年Geistlich等人[5]发现orf10具有转录活性。1996年Kuhstoss等人[6]描述了有关PKS合成途径的5个基因。1999年Pernodet等人[7]从生二素链霉菌中克隆得到了几个与螺旋霉素抗性有关...&
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0引言锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV),也称鲤鱼肾炎腮坏死病毒(Carp interstitial nephritis and gill necrosisvirus,CNGV)或鲤鱼疱疹病毒3型(cyprinid herpesvirus3,CyHV-3)[1-2]。属于疱疹病毒科(Herpesviridae),鲤疱疹病毒属(Cyprinid herpesvirus)[3-4]。根据世界动物卫生组织(Office International Des Epizooties,OIE)水生动物疾病诊断手册(2010)规定,针对KHV的检测方法主要包括细胞培养法和PCR方法。细胞培养法检测流程至少需要2周,敏感细胞系繁殖难度大灵敏度低;张旻等:锦鲤疱疹病毒ORF1基因的克隆、表达及多克隆抗体的制备PCR方法虽然灵敏度高,但只能检测病毒核酸,且有假阳性现象。免疫学方法具备灵敏度高、特异性强等优点,且能够检测活病毒,可以...&
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猪细环病毒(torque teno sus virus,TTSuV)为指环病毒科成员,根据基因序列的差异,将猪细环病毒分为2种不同的基因型,即基因1型和基因2型(TTSuV1和TTSuV2)。而TTSuV1被归为Iota-torquevirus属,TTSuV2则被归为Kappatorque-virus属[1]。猪细环病毒是一种无囊膜的单链环状球形DNA病毒,基因组全长约为2.8kb,基因组包含3个开放阅读框(ORF),即ORF1、ORF2和ORF3。其中ORF1被认为编码病毒衣壳蛋白[2],ORF2编码非结构蛋白参与病毒的复制[3],而ORF3的功能目前还不清楚[4]。自猪细环病毒2002年首次在日本被发现后[5],许多国家都检测到猪细环病毒的感染[6-9],据资料显示,猪细环病毒在健康和患病猪体内都存在较高的感染率,特别是在断奶仔猪多系统衰竭综合征(postweaning multisystemic wasting syndr...&
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传真：010-微生物培养时在倒好的平皿上再倒一层1.8%的琼脂夜可以制造厌氧环境吗_百度知道
微生物培养时在倒好的平皿上再倒一层1.8%的琼脂夜可以制造厌氧环境吗
我有更好的答案
个人看法：我觉得所得的厌氧条件十分有限，只是有一些作用琼脂液中含有水分，水分能溶解氧，水分能在琼脂中扩散，所以氧气在琼脂中还是有少量存在对于专性厌氧菌，氧气是剧毒，所以不能有任何氧一般做厌氧菌，需要一个绝对密封的厌氧罐，把培养物和厌氧条放进去之后，密封盖，厌氧条消耗氧气，造成无氧环境，这样厌氧菌才能生长
那烫手的琼脂液不久把菌烫死了吗？我做的时候是用试管，将菌种在培养基的内部。
不能，效果很差。最好还是用厌氧罐或者厌氧操作箱
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药物敏感实验（共4篇）
以下是网友分享的关于药物敏感实验的资料4篇，希望对您有所帮助，就爱阅读感谢您的支持。
微生物实验 药物敏感实验篇1
微生物 药物敏感实验? 一、实验目的 ? 1、熟悉和掌握圆纸片扩散法检测细菌对抗菌药物敏感性的操作程序和结果判断方法。? 2、了解药敏试验在实际生产中的重要意义二、实验原理? 将含有定量抗菌药物的纸片（药敏纸片）贴在已接种待检菌的琼脂平板表面特定部位。药物借其分子的扩散力向周围琼脂中扩散，形成了随着离纸片距离加大，琼脂中的药物浓度逐渐减少的梯度浓度。其纸片周围一定区域琼脂内的药物浓度高于抑制待检菌所需浓度时，则该区域内细胞不能生长，形成透明抑制圈。抑菌圈的大小可以反映待检对测定药物的敏感程度，抑菌圈愈大，说明该菌对此药物越敏感三、实验器材? 1．菌种 大肠埃希菌。? 2．培养基 牛肉膏蛋白胨培养基。? 3．试剂 无菌生理盐水，抗菌药物纸片：包括青霉素、氨苄西林、土霉素、链霉素等。? 4．其他 无菌棉拭子、镊子、毫米尺、接种环。四、实验方法和步骤? 1．菌液制备菌浓合适，一般为106? 2．接种细菌悬液制备后15min 内接种至倒好的牛肉膏蛋白胨培养基平板中，接种量0.1-0.2mL 。涂布均匀。 ? 3．贴药敏纸片? 涂布后的平板在室温下干燥3~5min，用纸片分配器或无菌镊子将纸片贴于琼脂表面并轻压，使纸片与琼脂表面完成接触。各纸片中心相距应大于24mm ，纸片贴上后就不能再移动位置。? 4．培养? 将平板倒置放入37℃培养箱培养，16~18h读取结果。五、实验结果六、思考题? 1. 圆纸片药敏试验操作时应注意什么事项？ ? 2. 试述药敏试验的意义 实验二 药物敏感性试验篇2
实验二 药物敏感性试验 实验目的与意义：各种病原菌对抗菌药物的敏感性不同，同种细菌的不同菌株对同一药物的敏感性也有差异，检测细菌对抗菌药物的敏感性，可筛选出最有疗效的药物，用于临床，对控制细菌性传染病的流行至关重要。学会检测细菌对抗菌药物敏感性的操作程序和结果判定的方法，能更科学地确定临床治疗方案。实验原理：通过培养基培养的细菌用药后，药物的扩散，使一定距离内的细菌在培养基上停止生长并且死亡，由此来判定一种药物对细菌的杀菌或抑菌作用的强度。受到抑制形成抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。实验材料菌种(大肠杆菌) 、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、三角瓶、烧杯、量筒、天平、高压灭菌器、PH 试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、棉绳、纱布、培养皿、微量移液器、涂布棒、药敏片、小镊子、酒精灯、尺子。实验步骤：（一）制备琼脂培养基：（略）（二）抗菌药物圆纸片（药敏片）扩散试验：倾倒琼脂培养基，倾注平板时，厚度合适（约5-6mm ），不可太薄，待培养基凝固时，取一菌种，均匀涂布于琼脂培养基表面，用无菌镊子将各种药敏片，分别贴于平板内并压实，各片距离要相等，每个平板上可放4－6片左右。然后标号，于37℃培养箱中放置18－24h 。（三）实验结果观察 ：过夜培养后在纸片周围形成一个抑菌圈，测定抑菌环的直径，记录该菌对某一抗生素的敏感性。实验结果与讨论：请简要写出细菌药敏试验的临床意义？注意事项：应注意影响试验结果的因素：要在无菌条件下操作，培养基应根据试验菌的营养需要来配制，此外药物浓度、细菌浓度也对试验结果有一定的影响。 附：琼脂培养基的制备： 用牛肉膏5克，蛋白胨10克、氯化钠5克，磷酸氢二钾1克，蒸馏水1000ML ，加热溶解用0.1N 氢氧化钠校PH 至7.4－7.6，再加入10－15克琼脂加热溶解，装入三角瓶中，高压灭菌20分钟。即可得到。 药物敏感试验实验报告篇3
药物敏感试验实验报告
篇一:药敏试验报告
药敏试验报告(琼脂稀释法)
一、实验目的
检测载铜离子土对沙门氏菌的最小抑菌浓度(MIC) 二、实验原理
三、实验材料与试剂
材料:平板，锥形瓶，10mL EP管等;
试剂:载铜离子土，沙门氏菌，琼脂平板计数培养基，MH肉汤培养基，硫酸(1%)，氯钡(0.25%)。 四、实验方法
1 配制琼脂平板计数培养基，按配方配制300mL，MH肉汤培养基100mL，待高压; 2 高压灭菌平板，锥形瓶，10mL EP管等;
3 沙门氏菌扩大培养:10ml EP管中加入 4ml MH肉汤培养基，4ul 菌液，放置摇床37?，220rpm过夜培养;
4 麦氏比浊管0.5的制备:0.25%氯化钡0.1ml，1%硫酸4.9ml。
(即细菌的近似浓度为×10/ml)
5 将扩大培养的沙门氏菌调制0.5麦氏比浊度后，再稀释100倍备用;
(每组做三个重复，16-24h后观察结果) 五、实验结果实验组1、2以及对照组平板中，肉眼可见针尖状半透明菌落，革兰氏染色后，镜下形态为红色短杆状，初步断定为沙门氏菌;实验组3、4、5未见菌落，涂片染色后，镜下也未观察到细菌。 六、结论
载铜离子土对沙门氏菌最小抑菌浓度(MIC)为3g/L。
篇二:001-药物敏感试验
抗菌药物实验方法――药敏试验
由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，细菌的耐药性问题正变得越来越突出，不少耐药菌株可耐受多种抗生素。由此而造成的危害十分严重，它不仅使抗菌药的疗效降低，疗程延长，死亡率升高和治疗费用增加。这不仅给养殖业带来巨大的经济损失，而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类，对人类健康也造成潜在威胁。专家强调指出，临床上应合理应用抗菌药，以避免或减少耐药性的产生，而合理应用抗菌药控制畜禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导临床用药，以充分发挥抗菌药疗效，并尽可能减少其不良影响。
目前由各种细菌所引起的疾病给畜禽养殖业带来严重经济损失，阻碍了养殖业的快速发展和经济效益，所以使用抗菌药预防和治疗细菌性疾病成了畜禽养殖过程中的一项重要工作。但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，细菌的耐药性问题正变得越来越突出，不少耐药菌株可耐受多种抗生素。由此而造成的危害十分严重，它不仅使抗菌药的疗效降低，疗程延长，死亡率升高和治疗费用增加。这不仅给养殖业带来巨大的经济损失，而且耐药菌株可能会将耐药性基因由动物转移给人类，对人类健康也造成潜在威胁。因此，临床上应合理应用抗菌药，以避免或减少耐药性的产生，而合理应用抗菌药控制畜禽疾病的一项重要内容就是通过药敏试验指导临床用药，以充分发挥抗菌药疗效，并尽可能减少其不良影响。
一、什么是药敏试验,
抗菌药物敏感性试验(Antimicrobial susceptibility test，AST)，简称药敏试验，是指对敏感性不能预测的分离菌株进行试验，测试抗菌药在体外对病原微生物有无抑制作用，以指导选择治疗药物和了解区域内常见病原菌耐药性变迁，有助于经验性治疗选药。药敏试验是兽医临床工作中的一项基本技能，也是使用抗菌药物治疗前必不可少的一道环节。
二、药敏试验的意义
1、可以相对快速有效地检测病原菌对各种抗菌药的敏感性，指导临床合理用药。因为实验是在体外对已经分离的细菌进行药敏，不需要生物载体，不需要实验动物，操作相对简单，成本相对降低。是一种既经济又有效的方法。
2、可以对流行病学调查进行监控，控制和预防耐药菌株的流行。因为随着新型致病菌的不断出现，各种致病菌对不同的抗菌药的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药的敏感性也有差异。进行有效的药敏试验可以及时掌握各种新型菌种和菌株的耐药性，对流行病学调查建立监控，同时采取相应的措施也就可以控制和预防耐药菌株的流行。
3、为临床用药提供参考依据。因为一个正确的药敏试验结果，可作为临床兽医和畜禽养殖者选用有效抗菌药的参考。长期以来，由于各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药药效下降或消失。不能很好的掌握药物对细菌的敏感程度，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。近十几年，在肉鸡生产中，为了控制大肠杆菌及某些细菌感染，一些抗菌药物的盲目使用，导致耐药菌株越来越多。根据已进行的大量药敏试验结果，大肠杆菌、沙门氏菌对曾经敏感的氨基糖苷类、氟喹诺酮类等，均产生了不同程度的耐药性，经常发现对十几种常用抗菌药都不敏感的菌株。这是一个非常危险的信号。所以在临床疾病防治工作中，要取得较好的治疗效果，应扩大常规抗菌药种类进行药敏试验，根据药敏试验结果，选择敏感药物，且应注意交替用药，按疗程投药，这样才能收到较好的治疗效果。
三、常用的药敏试验方法
兽医临床常用的药敏试验方法主要有两种，即扩散法和稀释法。其中扩散法属手工测试方法，通过测试药物纸片或者牛津杯在固体培养基上的抑菌圈的大小，判断细菌对该种药物是否敏感。稀释法包括试管
稀释法和微量稀释法，通过测试细菌在含不同浓度药物培养基内的生长情况，判断其最低抑菌浓度(MIC)。(一)纸片法
由于扩散法操作简单，成本低，已经被大多数实验室和基层单位所采用。扩散法又包括纸片法、牛津杯法和打孔法，目前牛津杯法和打孔法在兽医临床已较少应用。以下简单介绍纸片法。 1、药敏纸片的制作
纸片法中使用的药敏纸片目前市场上已有较多厂家的产品销售。但也可根据需要自制，具体自制的方法如下:
取质量较好的定性滤纸，用普通的打孔器打成直径6mm的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的小瓶或小平皿中，以单层牛皮纸扎口或包扎。经15磅15-20分钟高压灭菌后，置于37?温箱或烘箱中数天，使完全干燥。按每张纸片饱和吸水量为0.01ml计，在上述含有50片纸片的小瓶内加入药液0.5ml，不时翻动，使滤纸片将药液均匀吸净，一般浸泡30分钟即可。同时在记录药物名称，于37?温箱过夜。在温箱或烘箱中的时间不宜过长，以免某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低温下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮，置阴暗干燥处或家用冰箱中保存，有效期4-6个月。
2、药液的制备
自制药敏纸片时还需自行配制抗菌药液。抗菌药的稀释剂通常用蒸馏水。一般可按商品药使用说明书上的配料或饮水浓度，按1g需加多少毫升水或配多少毫克饲料，就相当于配制药液所加蒸馏水的毫升数。如10g药物可配50kg饲料，其换算方法为:1g本品加5000ml蒸馏水。此溶液液即为用于做药敏试验的药液。
3、试验操作方法
在超净工作台中或酒精灯旁，用无菌棉签或经酒精灯火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将菌液均匀涂布到平皿中的固体培养基表面。然后用无菌镊子将纸片放于固体培养基表面并轻压，使纸片与培养基表面完全接触。为了能准确观察结果，要求药敏纸片均匀分布于培养基上，位置安排适中，防止出现抑制圈重叠。一般各纸片中心相距应大于24mm，可在平皿中央贴一片，外周等距离贴5,6片。记住每种药敏纸片的名称。贴完纸片的平皿15分钟后再置于37?温箱中培养16,24小时，观察记录结果。以药敏纸片周围没有肉眼可见生长物区域为抑菌圈，根据抑菌圈直径大小判断细菌对抗菌药的敏感性。
表1 药敏试验结果判定标准
抑菌圈直径(毫米) 敏感性
10-14 ,10 0
极敏感 高敏感 中敏感 低敏感 不敏感
实践证明，利用自制药敏纸片进行药敏试验，可以灵活选药，与某病菌相关的药物均可随时制作药敏纸片用于治疗。可在本场药品范围内或本地区容易买到的药品中选出最敏感的药物。还可在短时间内选择最佳药品和最佳剂量，既能缩短病程，又能避免盲目用药，减少浪费。4、影响药敏试验结果的因素
在以纸片法进行药敏试验时，以下几方面因素可影响试验的结果:
(1)培养基:首先应根据试验菌的营养需要选择适宜的培养基。培养基的成分的不同，不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径。一般细菌，如大肠杆菌及葡萄球菌可使用普通营养琼脂;做磺胺类药物敏感试验时应选用无蛋白胨平板;链球菌和巴氏杆菌可用绵羊血琼脂平板。其次，倾注平板时，厚度应合适(约5-6mm)，不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18-20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP的活性。
(2)细菌接种量:细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。
(3)药物浓度:药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。
(4)培养时间:一般细菌培养温度和时间为37? 12-24小时，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好药敏纸片的培养基先置4?冰箱内2-4小时，使抗菌药预扩散，然后再放37?温箱中培养，可以推迟细菌的生长，而得到较明显的抑菌圈。
5、纸片法药敏试验存在的问题
当前进行药敏试验仍然存在一些问题，主要包括以下几方面:(1)方法学不统一，没有标准化。
(2)市场提供的药敏试验的培养基、药敏纸片等缺乏严格质控，质量难以保证。所以还是建议按要求自制药敏纸片。
(3)因需要先进行细菌的分离培养，所以药敏试验报告出结果时间长，检验与临床缺乏沟通，对于基层兽医站或养殖场，药敏结果不能满足临床治疗要求，容易延误治疗时机。但根据有关报道，也可进行简易的药敏试验，方法如下:无菌取病死畜禽的部分肝、脾等组织，按1:5加生理盐水研磨制成悬液，静置5分钟，用无菌吸管吸悬液，加两滴于营养琼脂板上，涂布均匀，5分钟后贴上药敏试纸，培养、观察抑菌圈大小。
(4)对于部分营养需求较高的细菌或微生物，如链球菌和支原体，临床上较难培养，限制了药敏试验的应用。
(5)部分养殖场或基层兽医站缺乏做细菌分离培养和药敏试验的意识。绝大多数养殖者或技术人员是在没有明确微生物学诊断的情况下使用抗菌药物，养殖场规模越小，细菌培养和药敏试验做的越少，有的养殖场轮翻使用多种抗菌药物而不做细菌培养和药敏试验，致使疗效不佳，治疗时机延误和药品的浪费。一些病例用药前不做药敏试验，而是在大量使用多种抗菌药物疗效不明显时才想起做细菌培养和药敏试验，而此时细菌已对多种抗菌药产生耐药性。
6、纸片法药敏试验中应注意的问题
药敏试验不仅是兽医工作中的一项基本技能，也是使用药物治疗前必不可少的一道环节，因此在实际操作过程中应注意以下几个问题，以保证试验结果的可靠性。
(1)病料采集:采集病料最好是典型的病例，原则上采集的时间越早越好，特别是夏季，如果时间过长会发生质变，影响试验的结果，通常采集5份以上，使其具有代表性。
(2)划线接种:在接种的过程中，所用剪刀或手术刀必须灭菌消毒，用酒精灯消毒时，在切口时注意不要过热，否则烫死细菌，划线涂布时—定要均匀。
(3)培养基的选择:如前所述，培养基的成分的不同，不仅影响敏感菌株的生长繁殖并可影响到抑制圈的直径。因此，操作过程中应注意培养基的选择，必要时可进行细菌分离培养。
(4)待试菌的涂布:用灭菌铂金耳无菌操作进行待试菌涂布时，应涂布均匀，并注意不要划破培养基的表面。
(5)贴纸片:贴纸片时位置一定要安排适中，防止出现抑制圈重叠。
(6)判定结果:根据试验不同要求，并严格遵守细菌生化实验室观察结果的时间要求，多在24小时内判定，注意时间过长或过短都会影响到抑制圈的正常结果。
(二)稀释法及其他方法
1、肉汤稀释法
1.1 常量肉汤稀释法
1.1.1.抗菌药物贮存液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗
菌药物可稍低于上述浓度。抗菌药物直接购自厂商或相关机构。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-60?以下环境，保存期不超过6个月。
1.1.2.药敏试验用抗菌药物浓度范围
根据抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度范围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。 1.1.3. 培养基
推荐使用Mueller-Hinton(MH)肉汤，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中加入2%(W/V)氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。
营养琼脂平板制备:牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂20g、蒸馏水1000ml 营养肉汤制备:牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、蒸馏水1000ml
1.1.4.接种物的制备
以细菌生长方法配制接种物:用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的MH肉汤中，37?孵育2-6h。对增菌后的对数生长期菌液进行平板菌落计数，一般约含10
CFU/ml。用MH肉汤将上述菌悬液进行1?稀释后备用。并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。
取无菌试管(13×100mm)10,12支，排成一排，除第1管加入1.6mlMH肉汤外，其余每管加入MH肉汤1ml，在第1管加入抗菌药物原液(如1280μg/ml)0.4ml混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取1ml弃去，第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。然后在每管内加入上述制备好的接种物各1ml，使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。另设药物对照(药物，营养肉汤)、培养基对照(营养肉汤)。
表2 试管稀释法操作方法1
按每管需1.0ml，每排12管计算，一排需13ml(首管为2.0ml)，如需重复4次，则共需42ml，计算损耗在内，应需50ml。依次类推。
b、菌液制备
最终需将菌液稀释成浊度为105CFU/ml的应用菌液。而菌原液浊度约为108CFU/ml，故共需稀释1000倍。
首先取菌原液(浊度约为108CFU/ml)0.2ml加至1.8mlMH肉汤中，混匀后取0.5ml加至49.5mlMH肉汤中，即为105CFU/ml的应用菌液50ml。c、计算所需菌液总量
取无菌试管(13×100mm)10,12支，排成一排，除第1管加入1.8ml应用菌液外，其余每管加入应用菌液1ml(或0.9ml)，在第1管加入抗菌药物原液(如1280μg/ml)0.2ml混匀，然后吸取1ml(或0.9ml)至第2管，混匀后再吸取1ml(或0.9ml)至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取1ml(或0.9ml)弃去，第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为128、64、32、16、8、4、2、1、
0.5、0.25、0.125μg/ml。
另设药物对照(药物，营养肉汤)、培养基对照(营养肉汤)。
表3 试管稀释法操作方法2
1.1.6.孵育
将接种好的稀释管塞好塞子，置37?普通空气孵箱中孵育16~20h。
1.1.7.结果判断与解释
在读取和报告所测试菌株的MIC前，应检查生长对照管的细菌生长情况是否良好，同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其是否污染。以肉眼观察，药物最低浓度管无细菌生长者，即为受试菌的MIC。
1.2 微量肉汤稀释法
1.2.1.抗菌药物和培养基制备 同常量肉汤稀释法。 1.2.2.MIC板制备无菌操作，将倍比稀释后不同浓度的抗菌药物溶液分别加到灭菌的96孔聚苯乙烯板中，第1至第11孔加药液，每孔10μl，第12孔不加药作为生长对照，冰冻干燥后密封，-20(本文来自:WWw.HNboxU.com 博 旭 范文 网:药物敏感试验实验报告)?以下保存备用。
1.2.3.接种物制备
将用生长法或直接菌悬液法制备的浓度为108,9CFU/ml菌悬液，经MH肉汤1?稀释后，向每孔中加100μl，密封后置37?普通空气孵箱中，孵育16~20h判断结果。此时，第1孔至第11孔药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125μg/ml。
1.2.4.结果判断
以在小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为MIC。当阳性对照孔(即不含抗生素)内细菌明显生长试验才有意义。当在微量肉汤稀释法出现单一的跳孔时，应记录抑制细菌生长的最高药物浓度。如出现多处跳孔，则不应报告结果，需重复试验。通常对革兰阴性杆菌而言，微量肉汤稀释法测得的MIC与常量肉汤稀释法测得的结果相同或低一个稀释度(1孔或2倍)。
2、琼脂稀释法
琼脂稀释法是将不同剂量的抗菌药物，加入融化并冷至50?左右的定量MH琼脂中，制成含不同递减浓度抗菌药物的平板，接种受试菌，孵育后观察细菌生长情况，以抑制细菌生长的琼脂平板所含最低药物浓度为MIC。本法优点是可在一个平板上同时作多株菌MIC测定，结果可靠，易发现污染菌;缺点是制备含药琼脂平板费时费力。 2.1.培养基制备
使用MH琼脂，按商品说明书进行配制，pH7.2~7.4。
2.2.含药琼脂平板制备
根据实验设计，将已倍比稀释的不同浓度的抗菌药物分别加入已加热溶解，并在45~50?水浴中平衡的MH琼脂中，充分混匀倾倒灭菌平皿，琼脂厚度3~4mm。通常按1?9比例配制药物琼脂平板，根据需要来选择药物浓度范围。配制好的含药琼脂平板应装入密封塑料袋中，置2~8?冰箱可贮存5天。
篇三:药敏试验与报告解读
药敏试验与报告解读
一、药敏试验
1、概念: 测定抗感染药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为药物敏感性试验，简称药敏试验。
2、目的:检测可能引起感染的细菌对一种或多种抗菌药的敏感性。
3、结果判断标准: 目前我国药敏试验判断标准参照CLSI标准文件，CLSI文件是我国的卫生部部颁文件。
二、MIC(minimal inhibitory concentration ，最小抑菌浓度)
1、概念:是指在体外试验中，抗菌药物能抑制培养基中细菌生长的最低药物浓度。是抗菌药抗菌活性指标，显示出药物抑制病原微生物的能力。
2、CLSI文件中关于敏感、中介、耐药的定义
???????敏感:最高血药浓度,4倍MIC，使用常规剂量有效;
???????中介:最高血药浓度?MIC，加大剂量或药物浓缩部位有效; ???????耐药:最高血药浓度,MIC，无效。
三、抗生素的等效性与抗菌谱
1、抗生素的等效性:是指用一种相关抗生素的试验结果预测同类抗生素体内抗菌活性。如头孢噻吩与其他一代头孢具有等效性，可用头孢噻吩结果预测其他一代头孢。此特性允许检测少数几种抗生素而不影响临床对其他抗生素广泛选择。
2、 抗菌谱:是指细菌在“野生菌”状态下能被抗生素在体内达到有效浓度时抑制的种类。这些细菌称为对该抗生素的天然敏感菌。未列在抗菌谱中的细菌则为天然耐药菌。
四、细菌的耐药性
1、细菌耐药性:是细菌抵抗抗菌药物杀菌、抑菌作用的一种防御能力，一种生物学的表型。
2、 天然耐药(固有耐药):耐药性为某种细菌固有的特点称细菌的天然或固有耐药性。天然耐药非常稳定，据此就可预测某一细菌或可能存在的细菌对某种抗生素是否耐药。
3、 获得性耐药:由于细菌获得耐药基因，使原来敏感的细菌变为耐药称细菌的获得性耐药。获得性耐药是目前临床面临的最主要的耐药问题。由天然敏感菌基因突变或获得一段基因片段，使其基因型改变而产生耐药。获得性耐药不断在变化(其变化频率与抗生素应用相关)，不能预测，需要做药敏试验。细菌的药物敏感性实验报告篇4
细菌的药物敏感性实验报告
细菌对药物的敏感试验
近年来，由于抗生素、磺胺等抗菌药物广泛应用，导致了耐药菌株不断出现。测定细菌对药物的敏感程度，对于临床治疗中选择用药，避免滥用药、及时有效地控制感染以及细菌鉴定，具有重要意义。
细菌敏感度的测定方法很多，世界卫生组织推荐的方法为Kirby-Bauer纸片法，该方法具有操作简便、易于掌握、且重视性好的优点，本法是将含药纸片贴敷在接种细菌的琼脂平板上，利用含药纸片在琼脂上的扩散作用来测定细菌对药物的敏感性。K-B纸片法的原理是建立在抗菌药物抑菌环直径大小与细菌的最小抑菌浓度(MIC)之间呈负相关的基础上，即抑菌环直径越大，则MIC越小。
结果判定:按抑菌环直径大小报告敏感、中度敏感或耐药。
敏感:是指被测菌株所引起的感染可以用常用剂量的某种抗菌药物治疗。
中度敏感:是指通过提高种抗菌药物的剂量或在该药浓集的部位，细菌生长可被抑制，感染可被治愈。这类药物毒性较小，剂量可以加大。β-内酰胺类药物可出现中度敏感。
耐药:是指被测菌株所引起的感染不能用常规剂量的抗菌药物所治愈。
中介度:这一范围是“缓冲域”是由试验的误差造成的不作为报告形式。如确需明确的敏感度，应重复实验或做稀释法，抑菌环为中介度的药物不可提高剂量。
最低抑菌浓度(MID):抗菌药物能够抑制细菌生长所需要的最低浓度。以针形接种器沾取菌液加至药盒各孔，35?培养过夜，含抗菌素浓度最低而无细菌生长的(清亮孔)，即为MIC。
最低杀菌浓度(MBC):抗菌药物杀灭细菌所需要的最低浓度。经48小时35?培养后，含抗菌素浓度最低而无细菌生长的(清亮孔)，即为MBC。
由于纸片法影响因素多，很难控制精度，现大多数医院采用MIC测定盒。
MIC由经典二倍肉汤稀释演化而来，具有终点判断精确，重复性好，操作简便等优点。此方法采用病美国DYNATECH接种器，更具科学性。
使用国产“华士达微生物自动分析仪”所做的定量药敏(MIC)试验，报告自动由打印机印出，附印出抗菌素对受试菌的MIC外，还可提供各种药物的用量，给药途径(口服、肌注、静滴)及血和尿中可能达到的药物浓度一览表，供临床医师参考。
纸片法抑菌环直径及其相当的MIC(表16-4)。
表16-4 抑菌环直径标准及其相当的MIC(不包括嗜血杆菌和淋球菌)
1990.4.NCCLS
?中介度:含意为模棱两可或不定。表16-5 嗜血杆菌抑菌环解释标准及相应MIC分界点
篇二:细菌药敏试验
实训 细菌的药物敏感性试验
使学生掌握细菌药物敏感性试验的操作方法，能够利用本试验方法选择敏感药物治疗兽医临床常见的细菌性传染病。
1(器材:温箱、天平、打孔机、滤纸、无菌试管及吸管、镊子、接种环、酒精灯等。
2(试剂:蒸馏水。
3(培养基:普通琼脂平板。
4(菌种:金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的固体培养物。 5(药品:链霉素、金霉素、新霉素、红霉素等抗菌药物。
6(硫酸钡标准管:取1%~1.5%氯化钡0.5ml加1%硫酸溶液99.5ml，充分混匀即成，用前充分振荡。
将抗菌药物置于接种待检菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，由此可根据抑菌环的大小，判定细菌对药物的敏感度。
(一)含药纸片的制备
1(滤纸片 最好选用新华1号定性滤纸，用打孔机打成直径6mm的滤纸片，放在小瓶中或平皿中，在121.3?灭菌15min，再置100?干燥箱内烘干备用。
2(药液的配制 用无菌蒸馏水将各药稀释成以下浓度:磺胺100mg/ml、青霉素100IU/ml、 链霉素、金霉素、新霉素、红霉素、多粘菌素1000μg/ml。
3(含药纸片的制备 将灭菌的滤纸片用无菌的镊子摊布于灭菌平皿中，按每张滤纸片饱和吸水量为0.01ml计算，50张滤纸片加入药液0.5ml。要不时翻动，使纸片充分吸收药液，浸泡1~2h后于37?温箱中烘干备用。对青霉素、金霉素纸片的干燥宜采用低温真空干燥法，干燥后立即放入瓶中加塞，放干燥器内或置-20?冰箱中保存。纸片的有效期一般为4~6个月。
(二)测验方法 1(钩取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌落各4~5个，分别接种于肉汤培养基中，37?培养4~6h。
2(用灭菌生理盐水稀释培养菌液，使其浊度相当于硫酸钡标准管。装有以上两种成分的试管须相同，硫酸钡应用前需充分振动。
3(用无菌棉拭子蘸取上述肉汤培养液，在试管壁上挤压除去多余的液体，在琼脂培养基表面均匀涂抹。每种细菌分别接种1~2个琼脂平板。
4(用玻璃铅笔在平皿底部标记药物名称。一个直径9cm的平皿最多只能贴7张纸片，6张均匀的贴在距平皿边缘15mm处，一张位于中心。
5(用灭菌镊子夹取干燥含药纸片，按标记位置轻贴在已接种细菌的琼脂培养基表面，一次放好，不得移动。
6(37?温箱中培养16~18h，观察、记录并分析结果。根据抑菌环直径的大小按实表2标准判定各种药物的敏感度。
实表1 细菌对不同抗菌药物敏感度标准
对于复方药物可通过比较各药物抑菌环直径的大小，在试验用药中选出最敏感的药物。
1(接种菌液的浓度必须标准化，一般以细菌在琼脂平板上生长一定时间后呈融合状态为标准。如菌液浓度过大，会使抑菌环减小;浓度过小，会使抑菌环增大。
2(接种后应及时贴上含药纸片并放入37?温箱中培养。
3(培养时间一般为16~18h，结果判定不宜过早，但培养过久，细菌可能恢复生长，使抑菌环缩小。
4(实验过程中要防止污染抗生素，否则可发生抑菌环缩小或无抑菌环现象 5(因蛋白胨可使磺胺失去作用，故磺胺类药物应采用无胨琼脂。 附:无胨琼脂的配制方法
牛肉膏或酵母浸膏 5.0g 氯化钠5.0g 琼脂 25g 水 1000ml
将牛肉膏或酵母浸膏、氯化钠和水混合后加热溶解，测定并矫正PH为7.2~7.4，过滤后加入琼脂，煮沸使琼脂充分溶化，121.3?高压蒸气灭菌15min，分装平皿，静置冷却即成琼脂平板。
操作程序:1、制备含药纸片:
(1)打孔机打出定量(20、30或50片)纸片，置于平皿内。 (2)纸片高压蒸汽灭菌器内灭菌，121.3?高压蒸气灭菌15min。 (3)灭菌后纸片置于100?干燥箱内烘干。 2、培养基准备
(1)营养琼脂:
?称取4.5克营养琼脂粉，加水100ML，微波炉中溶解后，置于高压蒸汽灭菌器内灭菌121.3?高压蒸气灭菌15min。
?灭菌后取出，倒板(倒入直径90,,灭菌平皿内，厚度2,3,,)，室温下静止，凝固后备用。
(2)营养肉汤
?称取营养肉汤粉定量，加水，微波炉中溶解，调节PH至7.2,7.6，分装试管(装量为试管高度1,3)高压蒸汽灭菌。
(以上操作中三处高压蒸汽灭菌可放一起完成) 3、菌种准备
(1)金黄色葡萄球菌: (2)大肠杆菌
4(药液稀释:
(1)用无菌蒸馏水或生理盐水将各药稀释成以下浓度: 青霉素:杀革兰氏阳性球菌(实验用金黄色葡萄球菌)，青霉素稀释成100IU/ml。
庆大霉素:杀革兰氏阴性菌(实验用大肠杆菌)，庆大霉素稀释成1,,/ml。 环丙沙星:广谱抗菌素。环丙沙星稀释成1,,/ml。 5(本实验(1)用无菌棉拭子蘸取上述肉汤培养液，在试管壁上挤压除去多余的液体，在琼脂培养基表面均匀涂抹。每种细菌分别接种1~2个琼脂平板。
(2)用玻璃铅笔在平皿底部标记药物名称。一个直径9cm的平皿最多只能贴7张纸片，6张均匀的贴在距平皿边缘15mm处，一张位于中心。
(3)用灭菌镊子夹取干燥含药纸片，按标记位置轻贴在已接种细菌的琼脂培养基表面，一次放好，不得移动。
(4)37?温箱中培养16~18h，观察、记录并分析结果。根据抑菌环直径的大小按标准判定各种药物的敏感度。
篇三:微生物实验报告细菌
微生物实验报告
一、实验目的 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 2013级临床医学八年制
1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的类型，学习并掌握培养基的原则与方法。
2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法。
3.了解并比较细菌在固体、半固体和液体培养基的生长特征。
4.学习并掌握空气及人体细菌检测学方法。
5.掌握细菌涂片标本的制备以及革兰染色法，熟悉不同类型细菌的基本形态。
6.掌握糖发酵实验、抗菌素敏感性实验和血浆凝固酶实验的原理与方法。
7.从脓汁和粪便标本中分离培养和检测出病原体。
二、实验器材
1.培养基的制备:干粉培养基、天平、蒸馏水、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、试管筐、移液管、棉塞、牛皮纸、橡皮筋、手套、石棉网
2.空气与人体体表细菌学检查:琼脂培养基、酒精、碘酒
3.细菌的分离培养:脓汁标本、粪便标本、伊红美蓝平板、营养琼脂平板、接种环、酒精灯、打火机
4.细菌的纯培养:接种环、酒精灯、打火机、中性笔、斜面培养基
5.细菌的形态学检测:斜面培养物、营养肉汤、生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、显微镜、接种环、酒精灯、打火机、中性笔、革兰染色试剂、液体培养基
6.细菌的生化试验:葡萄糖发酵管、乳糖发酵管、接种针、酒精灯、打火机、中性笔、菌液、营养琼脂平板、接种环、药物纸片(青霉素、庆大霉素、头孢曲松)、玻片、兔血浆、生理盐水
7.细菌的血清学试验:玻片、福氏志贺菌诊断血清、生理盐水、接种环、酒精灯
三、实验方法与步骤
1.培养基的制备
称量琼脂粉?蒸馏水?加热溶化?分装?集中放在试管筐里?罩上硫酸纸、牛皮纸? 用橡皮筋扎好 ?放入讲台边的灭菌桶或灭菌筐内?送到高压蒸汽灭菌室(洗刷室)?灭菌
2.空气与人体体表细菌学检查
2.1空气的细菌学检查
每组1个营养琼脂平板，选择实验楼女厕所?将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边?平板暴露于空气中15分钟?平板倒扣盖上?作标记?37?温箱培养24小时?观察结果。
2.2人体体表细菌学检查
甲丙常规洗手，乙丁标准洗手。甲和乙、丙和丁分别共用1个平板按下图在普通平板上接种手指上的细菌。第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。
3.细菌的分离培养
3.1 实验方法
平板划线法:借助于划线，将混杂的多种细菌，在平板表面分散成单个细菌，并固定在某一点上。培养以后细菌各自分裂繁殖，形成肉眼可见的细菌集团(单菌落)。
3.2实验步骤
接种环烧灼灭菌?分别取脓汁标本与粪便标本点在普通平板和依红美蓝平板上，各做两份，?烧掉接种环上多余的标本?冷却后，应用分区划线分离法，将脓汁标本接种于营养琼脂平板(2份)，粪便标本接种于伊红美蓝平板(2份)?接种环烧灼灭菌?将平板倒置37?培养18,24h?观察结果 。
4.细菌的纯培养
甲?普通平板?金黄色菌落(auratus，golden yellow)?1支斜面
乙?普通平板?白色菌落(albus，white)?1支斜面
丙? EMB平板?紫黑色菌落(atropurpureus)?1支斜面
丁? EMB平板?粉红色菌落(pink) ?1支斜面
斜面正面上2/3作标记:组号 + 金黄、白色、紫黑、粉红。
5.细菌的形态学检测
5.1革兰试剂染色
5.2显微镜油镜使用步骤
10×物镜?看清标本?滴加香柏油?100×油镜?浸泡油中?模糊物象?细调节调焦，观察物像?记录结果?关闭电源? 擦镜纸拭去香柏油 ?擦镜纸沾少许乙醇和乙醚(7:3)
混合液擦拭?擦镜纸擦拭油镜。
5.3肉汤接种法
接种环烧灼灭菌?分别在斜面培养物中挑取菌苔少许?立即移入肉汤培养基管中?在接近液面的管壁上轻轻研磨?沾取少量肉汤调和?混匀?试管口通过火焰2-3次灭菌?塞好棉塞?35?培养4~6小时
6.细菌的生化试验
6.1细菌的糖发酵实验
接种针烧灼灭菌?用灭菌接种针分别刮取实验所得到的紫黑色和粉红色菌苔?分别接种在葡萄糖发酵微量管中和乳糖发酵微量管内?(来自:www.XIelw.Com 写 论文网:细菌的药物敏感性实验报告)接种环烧灼灭菌?将微量管平放在平板内?37?培养过夜后?观察结果。
6.2药敏实验
接种环烧灼灭菌?分别取之前实验中得到的四种菌液在普通平板密集涂布(如图6)?接种环烧灼灭菌? 标记:青、头、庆 ?镊子火焰消毒?贴青霉素、头孢曲松、庆大霉素纸片? 按压?镊子消毒?倒置37?培养
6.3凝固酶实验
取干净玻片一张?在左右两边分别滴加兔血浆1-2滴，生理盐水1滴?接种环烧灼灭菌?冷却?分别用接种环取之前实验所得到的白色和黄色菌苔(2,3个菌落的菌量)与血浆研磨混合?边混匀边观察结果?接种环烧灼灭菌?稍等片刻，观察结果
6.4动力实验
接种针烧灼灭菌?分别用接种针在紫黑色和粉红色的斜面取菌?从半固体培养基中心垂直刺入，可刺达近底管处，但不要到达管底?循原来的路线退出接种针?试管口迅速通过
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