探讨p38MAPK信号通路介导的头花蓼治疗幽门螺杆菌胃炎的研究机制--《贵州医科大学》2018年硕士论文
探讨p38MAPK信号通路介导的头花蓼治疗幽门螺杆菌胃炎的研究机制
【摘要】：目的:通过建立幽门螺杆菌胃炎(Helicobacter pylori gastritis)的细胞模型,观察p38MAPK与苗药头花蓼治疗幽门螺杆菌胃炎的关联,通过特异性阻断剂SB203580与激动剂Anisomycin阻断或激活p38MAPK信号通路的不同环节,探讨头花蓼在治疗过程中的调控靶点。方法:(1)H.pylori 700392与人永生化胃上皮细胞(GES-1)以100:1比例共同培养12h,建立细胞模型,光学显微镜及电子显微镜观察感染前后GES-1细胞形态结构变化~([1])。(2)Western-blot实验检测空白对照、模型、头花蓼组细胞总ERK1/2(T-ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(P-ERK1/2)、总JNK1/2(T-JNK1/2)、总p38MAPK(T-p38MAPK)、磷酸化(P-p38MAPK)蛋白表达。(3)MTT比色法观察头花蓼、SB203580、Anisomycin、对细胞增殖抑制的影响。将细胞分为空白组、模型组、头花蓼组、SB203580组、头花蓼+Anisomycin、头花蓼+Anisomycin+SB 203580组。(4)各实验组采用蛋白印迹实验检测总p38MAPK(T-p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(P-p38MAPK)、总CREB、P-CREB蛋白以及下游炎症因子TNF-α表达的变化。(5)通过划痕实验观察SB203580作用H.pylori感染的GES-1细胞后,探讨p38MAPK信号通路与细胞迁移与修复能力的关系。(6)激光共聚焦(Laser confocal)实验观察头花蓼对H.pylori感染后GES-1细胞中T-p38M APK及P-p38MAPK在细胞内的定位影响。结果:(1)H.pylori感染GES-1细胞12h后,光学显微镜观察结果显示模型组细胞多瘦长,表面不光滑,颗粒物质明显增多,经头花蓼治疗后细胞由瘦长变得圆润,表面颗粒减少;扫描电镜观察显示模型组细胞较空白组瘦长且粗糙,有各种物质散落在表面,头花蓼组较模型组细胞丰满,黏附细胞表面物质减少;透射电镜结果显示,H.pylori感染后组细胞较空白组细胞表面粗糙,伪足肿胀,绒毛消失,头花蓼组较模型组伪足肿胀消失且绒毛出现。(2)Western-blot实验结果表明,模型组与空白组比较P-p38MA PK、P-JNK2、T-ERK1、T-ERK2、P-ERK1、P-ERK2蛋白表达上调1.623±0.030倍、2.066±0.080倍、1.610±0.033倍、1.433±0.043倍、2.719±0.235倍、3.487±0.090倍,差异具有统计学意义(P0.05);而模型组T-P38MAPK、T-JNK1、T-JNK2、P-JNK1与空白组比较无显著差异;与模型组比较头花蓼组P-p38MAPK、ERK1、ERK2、P-ERK1、P-ERK2、T-JNK2蛋白表达下调1.527±0.057倍、1.525±0.053倍、1.383±0.044倍、2.381±0.129倍、2.107±0.061倍,1.675±0.049倍,差异具有统计学意义(P0.05);头花蓼组T-p38MAPK、T-JNK1、T-JNK2、P-JNK1、P-JNK2与模型组比较无显著差异且无统计学意义。(3)光学显微镜下观察H.p ylori感染12h的GES-1细胞发现,头花蓼与SB203580组胞表面较模型组光滑,颗粒物质减少;Anisomycin组细胞表面变为与模型组相似的表面粗糙,颗粒物质明显增多。(4)通过Laser confocal发现,H.pylori感染的GES-1细胞P-p38MAPK蛋白核内表达量明显高于空白组,经头花蓼治疗后P-p38MAPK蛋白核内表达量显著降低,而T-p38MAPK蛋白在空白组、模型组、头花蓼组细胞核中的表达量无明显差异。(5)MTT比色法结果显示,当头花蓼浓度≤80μg/mL、SBμmol/L、Anisomycin≤8nmol/L、Anisomycin≤6nmol/时对GES-1细胞模型增殖抑制无显著影响。(6)Western-blot结果显示,模型组与空白组比较P-p38 MAPK、P-CREB、TNF-α蛋白表达量上调为3.465±0.078倍、5.256±0.8763倍、4.376±0.089倍,差异具有统计学意义(P0.05);头花蓼+Anisomycin组较空白组P-p38MAPK、P-CREB、TNF-α蛋白表达量上调为2.809±0.104倍、4.577±0.789倍、3.177±0.531倍,(P0.05);头花蓼组较模型组比较P-p38MAPK、P-CREB、TNF-α蛋白表达量下调1.804±0.040倍、1.499±0.012倍、2.139±0.030倍,(P0.05);SB203580组较模型组P-p38MAPK、P-CREB、TNF-α蛋白表达量下调1.465±0.013倍、1.490±0.006倍、1.745±0.009倍,(P0.05);头花蓼+Anisomycin+SB203580组较模型组P-p38MAPK、P-CREB、TNF-α蛋白表达量下调2.334±0.023倍、4.169±0.036倍、2.941±0.0184倍,(P0.05);总p38MAPK、总CREB蛋白表达量在空白、模型、头花蓼、SB203580组、头花蓼+Anisomycin、头花蓼+Anisomycin+SB203580间无明显差异且无统计学意义。结论:1.H.pylori感染使得GES-1细胞出现损伤,细胞表面粗糙,有杂质等改变,头花蓼治疗后,细胞圆润较光滑,颗粒物质与杂质明显减少。2.头花蓼可能通过调节p38MAPK信号通路磷酸化水平,调控H.pylori感染GES-1细胞炎症因子的表达,从而减轻模型细胞的病理改变。
【学位授予单位】：贵州医科大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2018【分类号】：R285.5
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头花蓼对H.pylori相关性胃炎细胞增殖、凋亡的影响及其机制的探讨
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头花蓼对H.pylori相关性胃炎细胞增殖、凋亡的影响及
关注微信公众号头花蓼对幽门螺杆菌感染性胃炎大鼠Gas及SS表达的影响--《贵州医科大学学报》2016年12期
头花蓼对幽门螺杆菌感染性胃炎大鼠Gas及SS表达的影响
【摘要】：目的:检测头花蓼对幽门螺杆菌(H.pylori)感染SD大鼠胃粘膜胃泌素(Gas)和生长抑素(SS)表达的影响,探讨头花蓼抗H.pylori感染性胃炎的作用机制。方法:42只SD大鼠随机分为造模组26只和空白组16只,采用H.pylori标准菌灌胃SD大鼠建立H.pylori慢性胃炎大鼠模型;造模成功后,造模大鼠分为模型组和头花蓼组,头花蓼组以1.72 g浸膏/(kg·d)的剂量灌胃给药,模型组和空白组大鼠灌胃等量生理盐水,治疗2周后处死大鼠,取胃窦黏膜组织,HE染色观察大鼠胃黏膜组织学改变;免疫组织化学染色观察胃黏膜Gas阳性细胞和SS阳性细胞的改变,原位杂交检测大鼠胃黏膜Gas和SS mRNA的表达水平。结果:与模型组比较,头花蓼可明显改善H.pylori感染大鼠胃黏膜炎症,病理评分显著降低(P0.05);头花蓼组大鼠胃黏膜Gas阳性细胞数量明显减少,Gas mRNA表达水平明显下降,差异具有统计学意义(P0.05);SS阳性细胞数量、SS mRNA表达水平较模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:头花蓼可修复H.pylori感染慢性胃炎胃黏膜损伤,其机制可能与改善胃肠激素对胃功能调节有关。
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400-819-9993头花蓼对幽门螺杆菌相关性胃炎大鼠胃组织SIRT1、p53和p21的影响--《贵州医科大学学报》2018年03期
头花蓼对幽门螺杆菌相关性胃炎大鼠胃组织SIRT1、p53和p21的影响
【摘要】：目的:观察头花蓼对幽门螺杆菌相关性胃炎(HAG)的治疗效果及对HAG胃组织中SIRT1/p53/p21信号通路的影响。方法:30只SD大鼠均分为正常对照组、模型组和药物组,正常对照组给予无菌脑心浸液肉汤灌胃,模型组和药物组大鼠给予H.pylori灌胃(1×1011CFU/L SS2000菌液1.5 m L/只)建立HAG模型,药物组HAG模型大鼠给予1.58 mg/(kg·d)头花蓼灌胃治疗,正常对照组大鼠和模型组大鼠给予等量无菌生理盐水灌胃,连续给药14治疗结束4周时检测大鼠胃组织H.pylori定植量、观察各组大鼠胃黏膜组织学改变,采用Real time PCR和Western blot技术检测大鼠胃组织SIRT1、p53及p21 mRNA及蛋白表达水平。结果:正常对照组大鼠胃组织H.pylori定植量为0,模型组和药物组大鼠胃黏膜均有H.pylori定植,与模型组比较,药物组H.pylori定植量显著降低(P0.05);正常对照组大鼠胃组织无病理形态学改变,模型组大鼠H.pylori感染后的胃黏膜腺体排列不规则,胃黏膜固有层中有较多淋巴细胞浸润,细胞浸润多呈弥漫性;药物组大鼠胃组织病理形态学改变少于模型组;与正常对照组比较,模型组病理评分显著升高,而药物组病理评分显著低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);H.pylori感染后,与正常对照组相比,模型组大鼠胃组织SIRT1、p53基p21 mRNA表达量增加(P0.05);头花蓼治疗后,与模型组相比,药物组大鼠胃组织SIRT1、p53及p21 mRNA水平都明显升高(P0.05);与正常对照组相比,模型组大鼠胃组织SIRT1、p53及p21蛋白表达均有所升高,但差异无统计学意义(P0.05);而头花蓼治疗后,与模型组相比,SIRT1、p53和p21蛋白表达明显升高(P0.05)。结论:头花蓼治疗可能是通过上调SIRT1、p53和p21基因表达来发挥作用。
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正常人体各种激素水平处于动态的平衡中，受控于严格的调控系统。而重度颅脑损伤引起的应激状态则打破了这种平衡。脑肠肤在这一过程中如何引起消化道病变，目前研究较少，我们通过动态观察血液中的胃泌素(gastrin，GAS)、生长抑素(somatostatin，55)的水平变化，来探讨这两种脑肠肤与急性胃粘膜病变(aeute gastrie mueosa一lesion，AGML)的关系。对象与方法一、一般资料45例重度颅脑损伤患者(伤后24h内GCS评分 (++)或大便潜血(++)，则判定为AGML，若呕吐物(或胃液)中潜血+一++或大便潜血+一+ +，行纤维胃镜检查，以镜下观来判定是否有AGML。四、研究方法1.对照组:选用无颅脑损伤病史，无心、肺、胃病史的健康人体检患者，清晨空腹采集静脉血4耐。2.颅脑损伤组:所有患者(伤后24h内)均在人院后未经任何处理前采集静脉血4ml，以后第3、7、rod均于清晨空腹状态下采集静脉血4而;采血同...&
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抑郁症是一种慢性的、具有高复发率的精神性疾病[1],据估计,到2020年,抑郁症将成为世界第二大致残性的疾病[2]。抑郁症的临床表现除了抑郁心境、思维迟缓、言语动作减少等外,往往伴有胃肠功能失调的现象,如食欲减退、腹痛腹泻、便秘等。通过临床及研究发现,给予抑郁症患者中药汤剂加味逍遥散治疗后,除了减轻抑郁的症状外,还能显著改善胃肠功能的失调[3,4]。加味逍遥散是本团队在临床上的经验方,是在《太平惠民和剂局方》中逍遥散的基础上增加了香附、郁金、合欢皮、远志、酸枣仁等药物,以增强其疏肝解郁、宁心安神的功效。此方主要通过调节中枢系统信号传导通路发挥抗抑郁的作用,其调节胃肠功能失调的机制尚不明确[5]。有证据表明胃肠功能失调与脑肠轴密切相关[6~8]。本实验旨在观察加味逍遥散对胃肠功能失调的抑郁大鼠脑肠肽生长抑素(SS)和胃泌素(GAS)表达的影响,从而探讨其对脑肠轴调控的效应及机制。1材料与仪器1.1实验动物雄性Sprague-Daw...&
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功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)是临床上比较常见的一种功能性胃肠病(FGID),主要包括是上腹痛、上腹烧灼感、餐后饱胀、早饱等症状[1]。FD全球总患病率约为10%~30%[2],我国发病率占消化门诊病例的30%~40%[3],严重影响着人们生活质量,已逐渐成为危害认为健康的常见疾病。多数人认为其病因和发病机制是由胃肠动力异常、幽门螺旋杆菌感染、内脏高敏、精神心理异常多种因素综合作用的结果[4~5]。近年来随着研究的深入,脑肠轴的作用被广泛重视,认为脑肠肽水平的紊乱可导致FD的发生[6]。已有不少学者通过临床和动物实验验证,针灸治疗功能性消化不良是有效治疗措施,较常规西药治疗有其独特的优势[7~8]。因此本研究采用电针为治疗方法,观察实验过程中FD大鼠的一般情况变化,检测治疗后FD大鼠的胃排空以及GAS、SS表达的变化,探讨脑肠肽在电针治疗功能性消化不良中的作用,为电针治疗功能性消化不良提供科学依...&
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