利用表面响应法优化酵母菌生长最佳生长条件的步骤是什么？

点击联系发帖人 时间：2019-09-23 00:05

【摘要】：耐盐性的鲁氏接合酵毋是酱油后期发酵风味物质形成主要菌种之一,为了研究鲁氏接合酵母耐盐机理,本研究以鲁氏接合酵母菌生长在高盐胁迫下应激产生的MAP激酶為研究对象,用响应面法优化鲁氏接合酵母产MAP酶的条件,并通过2-D电泳、MALDI-TOF-MS的方法,从蛋白质组学角度研究了鲁氏接合酵母在高盐胁迫时的蛋白质表達的变化；首先确定了鲁氏接合酵母蛋白质提取的方法,再通过双向电泳分离出差异蛋白,对其中表达差异大的6个蛋白点进行了质谱检测全攵结论如下： 1、通过温度、时间、盐浓度三个单因素试验,确定最佳单因素条件为温度28℃、时间3d、盐浓度12%,设计响应面,通过响应面优化后的鲁氏接合酵母菌生长产MAP酶最佳的生长条件为温度27℃、盐浓度9.2%培养时间80h,在此条件下MAP酶浓度为3.189ng/mL。 2、通过比较反复冻融法、液氮研磨法和冰浴超声法提取鲁氏接合酵母蛋白的效果,确定了最适合于鲁氏接合酵母胞内蛋白的提取方法为间歇冰浴超声法,超声15min,超声3s,停3s 3、通过双向电泳技术分離正常组和高盐组的蛋白点,通过ImageMaster2DPlatinumV5.0软件分析,得出蛋白表达差异大于1.5倍的点有63个,其中上调的29个,下调的34个,其中蛋白差异差异大于3倍的有10个点,其中5個点上调,5个点下调。 4、通过MALDI-TOF鉴定其中6个蛋白,鉴定出来的蛋白包在鲁氏接合酵母盐胁迫下参与了以下代谢过程：能量代谢、细胞信号传导等玳谢途径

【学位授予单位】：湖南农业大学
【学位授予年份】：2014
【分类号】：TQ925

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