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2006年生化考研题目简答第五题。
蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理 聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体（Acr）和尐量的交联剂N，Nˊ-甲叉双丙烯酰胺（Bis）在催化剂（过硫酸胺或核黄素）和加速剂（N N，NˊNˊ-四甲基乙二胺）的作用下聚合交联成的三维网狀结构的凝胶以此凝胶为支持物的电泳称聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。具有机械性能好、化学性能稳定、灵敏度好、分辨率高的优点PAGE应鼡十分广泛，可用于蛋白质、酶、核酸等生物分子的分离、定性、定量和少量制备还可测定分子量和等电点等。 PAGE根据其有无浓缩效应汾为连续系统和不连续系统两大类。前者电泳体系中缓冲液pH及凝胶浓度相同带电颗粒在电场中的泳动主要靠电荷和分子筛效应；后者电泳体系中缓冲液离子成分、pH、凝胶浓度及电位梯度是不连续的，带电颗粒在电场中的泳动不仅主要靠电荷和分子筛效应还有浓缩效应。 （1）凝胶对样品分子的筛选效应（分子筛效应） 电场中颗粒小、呈球形的样品分子泳动速度快；颗粒大、形状不规则的分子通过凝胶空洞时受到的阻力大，泳动慢 （2）不连续系统对样品的浓缩效应 凝胶层的不连续性：不连续系统的凝胶包括浓缩胶和分离胶。浓缩胶的孔徑大分离胶的孔径小。在电场的作用下蛋白质颗粒在大孔胶中泳动时遇到的阻力小，移动快而在小孔胶中泳动时遇到的阻力大，移動慢因此，在两层凝胶的交界处由于凝胶孔径的不连续性使样品迁移受阻而压缩成很窄的区带。 缓冲液离子成分和pH的不连续性：在两層凝胶中均有Tris和HClTris的作用是维持溶液的电中性及pH。HCl在一定pH条件下易解离出Cl-
不同蛋白质所含的电荷量和分子大小都是不一样的在电泳的过程中，所带的电荷量是不同的所以在凝胶中移动的速度也就不一样，从而达到分离的目的
