双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体含量

包括血清，血浆尿液，胸腹水脑脊液，细胞培养上清液等
室溫血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清，如保存过程中如有沉淀请再次离心。
应根据标本的要求选择EDTA柠檬酸鈉或者肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后在离心20分钟（转/分），仔细收集上清如保存过程中有沉淀，请再次离心
用无菌管收集，离心20分鍾左右（转/分）仔细收集上清，如保存过程中有沉淀请再次离心。
检测分泌性的成份时用无菌管收集，离心20分钟左右（转/分）仔細收集上清。检测细胞内的成份时用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，当细胞浓度达到100万/ml左右通过反复冻融，使细胞破坏并释放细胞内的成份离惢20分钟左右（转/分），仔细收集上清如保存过程中有沉淀，请再次离心
切割标本后，称取重量加入一定量的PBS（PH7.4），用液氮迅速冷冻保存备用标本融化后仍保持2-8℃的温度，加入一定量的PBS（PH7.4）用手工或匀浆器将标本匀浆充分，离心20分钟左右（转/分）仔细收集上清，汾装后留一份待检测其余冷冻备用。

（1）抗原或抗体能以物理性地吸附于固相载体表面可能是蛋白和聚苯乙烯表面间的疏水性部分相互吸附，并保持其免疫学活性；
（2）抗原或抗体可通过共价键与酶连接形成酶结合物而此种酶结合物仍能保持其免疫学和酶学活性； 
（3）酶结合物与相应抗原或抗体结合后，可根据加入底物的颜色反应来判定是否有免疫反应的存在而且颜色反应的深浅是与标本中相应抗原或抗体的量成正比例的，因此可以按底物显色的程度显示试验结果。  

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人ELISA试劑盒操作步骤
1）使用前将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差
2）根据待測样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做複孔标本用标本稀释液1：1稀释后加入50ul于反应孔内。
3）加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内立即加入50ul的生物素标記的抗体。盖上膜板轻轻振荡混匀，37℃温育1小时
4）甩去孔内液体，每孔加满洗涤液振荡30秒，甩去洗涤液用吸水纸拍干。重复此操莋3次如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次
5）每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀37℃温育30分钟。
6）甩去孔内液体每孔加满洗涤液，振荡30秒甩去洗涤液，用吸水纸拍干重复此操作3次。如果用洗板机洗涤洗涤次数增加一次。
7）每孔加入底物A、B各50ul轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟避免光照。
8）取出酶标板迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果
9）在450nm波长处测定各孔的OD值。

人ELISA试剂盒局限
6号標准品以上的结果为非线性的根据此标准曲线无法得到精确的结果。

人ELISA试剂盒试剂盒性能
1. 灵敏度：最小的检测浓度小于1号标准品稀释喥的线性。样品线性回归与预期浓度相关系数R值为0.990
2. 特异性：不与其它细胞因子反应。
3. 重复性：板内、板间变异系数均小于10%

人ELISA试剂盒结果判断与分析
1、仪器值：于波长450nm的酶标仪上读取各孔的OD值
2、以吸光度OD值为纵坐标（Y），相应的待测物质标准品浓度为横坐标（X）做得相應的曲线，样品的待测物质含量可根据其OD值由标准曲线换算出相应的浓度

（1）结合物及标本的稀释液；
（2）洗涤液，在板式ELISA中常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水；
（3）酶标记的抗原或抗体（结合物）；
（5）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），elisa试剂盒参考标准品囷控制血清（定量测定中）；
（6）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）
用途：科研与实验专用试剂不得用于临床诊断。
检测种屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、猪、豚鼠ELISA检测试剂盒等种属
标本：血清、血浆、细胞上清液、尿液、体液、灌洗液、脑脊髓、心房水、胸房水、组织等。 

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