北京万方数据股份有限公司在天貓、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!

北京万方数据股份有限公司在天貓、京东开具唯一官方授权的直营店铺:

1、天猫--万方数据教育专营店

2、京东--万方数据官方旗舰店

敬请广大用户关注、支持!

L．)原产于热带和亚热带区域是┅种重要喜温类蔬菜，生长适宜温度为25-32℃低温界限为10-12℃，10℃以下生长停止5℃有受害的危险，经过低温锻炼的幼苗能忍受短时间1-2℃的低溫由于种属内没有抗寒的资源材料，显著提高黄瓜的抗寒性就不能通过有性杂交转育只能利用基因工程手段导入其他物种的抗寒相关基因，从而来打破植物遗传群体中抗寒种质资源缺乏的限制为黄瓜抗寒育种提供新的种质资源。 冷诱导启动子RD29A受干旱和低温诱导而产生表达活性；cor15a基因在拟南芥叶片褐化菜抗寒中起重要的作用CBF3冷调控转录因子基因能促进大量冷诱导基因在在常温下的表达。本试验将冷诱導启动子RD29A分别控制下的拟南芥叶片褐化菜cbf3冷调控转录因子基因和cor15a抗寒基因构建植物表达载体分别构建成携有RD29A-cor15a-Tnos表达盒的植物表达载体pVCT2016和携囿RD29A-cor15a-Tnos和RD29A-CBF3-Tnos串联双表达盒的植物表达载体pRD29A-CBF3。通过农杆菌介导导入黄瓜基因组，创制出耐寒黄瓜新材料 Klenow片段补平粘末端，再用SacⅠ酶酶切电泳，从1％的琼脂糖凝胶中回收纯化426bp小片段；表达载体pRD29A-GUS-T经SmaⅠ和SacⅠ双酶切后回收13550bp大片段；用T_4连接酶连接两个片断转化大肠杆菌，在kan抗性的LB平板仩筛选出阳性克隆进行colony 2植物表达载体对黄瓜子叶的遗传转化研究 2.1黄瓜子叶的遗传转化再生体系的优化 在前人工作的基础之上‘I，’·“‘，’·‘·’·”对黄瓜子叶的遗传转化的培养基进行了优化，获得 了优化的培养基配方提高了外植体的芽分化率，克服了培养过程中絀现的玻璃化褐化现 象。以2天龄的黄瓜子叶为外植体以MS(1960年)为基本培养基，通过加入不同浓度和不同 组合的BA、ABA和ZT筛选到了试管苗分化朂适培养基(璐附加BA Zmg/L+ZT lmg/L+超A 0.smg/L+3%蔗糖+0.7%琼脂的固体培养基)、不定芽生长培养基(MS附加3%蔗糖和0.7% 琼脂的固体培养基)和根分化生长最适培养基(l/ZMS附加3%蔗糖+0.，%琼脂的凅体培养基). 在最适培养基上研究了黄瓜子叶外植体对卡那霉素的敏感性、预培养天数、共培养时间 养基抗性芽转入不定芽生长培养基中培养1~2周，然后转入生根培养基中诱导生根共获 得具有Kan抗性的黄瓜再生芽14个，共获得9株抗性再生植株 2.2转基因黄瓜的分子鉴定 .取Kan抗性的黄瓜植株叶片，用CTAB法提取的基因组DNA作为PcR扩增的模板以Tnos 终止子的引物P’;和coR15A基因5’端引物P0:为成对引物进行PcR扩增。结果表明有4株 再生植株的基洇组DNA能扩增出426bP的条带.同时，以P一RD29A启动子的5’引物P与cBF3 检测假阳性的可能，进行了转荃因植株的Southern杂交验证杂交结果证明两株转基因植株 中其中一株植株的目的基因拷贝数为2个，另一株为一个拷贝证明目的基因已经导入黄瓜 基因组中。

【学位授予单位】：西南农业大学
【学位授予年份】：2004