芝麻能打落叶剂怎么使用吗

点击联系发帖人 时间：2020-09-08 06:35

落叶剂怎么使用

提问：芝麻地用什么除草剂

回答：可以用精喹或高盖防治禾本科杂草安全性好。

提问：花生能不能和芝麻套种两种作物施药会不会影响对方生长谢谢各位专家老师给予解答

回答：建议分开种植为好一是不利于花生生长，二是苗后防除阔叶杂草时芝麻可能一起会被除掉

提问：芝麻地除草剂用什么

回答：莖叶除草:高效氟吡甲禾灵或精稳杀得或精喹禾灵茎叶喷雾防治禾本科杂草如马唐稗草等若恶性多年生禾本科杂草最好再添加喷雾助剂如酯化植物油

提问：施田补除草剂能在芝麻上用吗？苗前用的

提问：有芝麻地里的除草剂吗

提问：巴斯夫的百垄通现在花生地里用了多长时間可以红薯和芝麻百垄通效果怎么样，有没有对花生影响谢谢

回答：百垄通残留期较长如果主要防治莎草的话，建议选用灭草松防除对下茬种植的作物比较安全

提问：玉米茬能种芝麻吗？

回答：间隔半年以上基本可以种植了用量过大，不行

回答：如果芽率没问题的話怀疑是播种较深和地温低造成的。

提问：芝麻地封闭能用二甲戊灵吗

回答：不能用。用精异丙甲草胺

提问：芝麻地里咬根的肉虫，在地下不出来。用什么药治

回答：可以，但要经过充分腐熟才能使用

提问：请问芝麻是什么病用什么药防治？

提问：老师们西瓜仩芝麻饼什么时候上我西瓜刚四叶需要发哮吗

回答：你西瓜都团棵了如果还上饼肥，只能用水把饼浸泡至完全腐烂发酵成液再配5-10公斤複合肥随水冲施。效果萌萌哒！

提问：昨天刚打的氯氟吡氧乙酸现在可以种大豆芝麻吗

回答：不行建议间隔2个月以上较好

提问：芝麻地囿没有封闭药

提问：二甲戊灵能用在芝麻地吗？

回答：芝麻播种后可以封地面不出草。

提问：请问专家硫酸钾复合肥能与芝麻同播吗？

提问：花生地中可以套芝麻吗

提问：芝麻苗后灭草松能用吗

回答：理论上可以用现实中用的很少包括氟磺胺草醚

提问：芝麻的行情怎麼样？

回答：你最好查查市场信息或者问问行内人士，或者发在田园圈增加曝光。

提问：绿豆田和芝麻田用什么苗后除草剂请赐教。

回答：绿豆用精喹禾灵加灭草松或氟磺胺草醚芝麻田阔叶草还没太合适的

提问：二甲戊灵能封闭芝麻吗

提问：老师说这个是通用型的轉杀禾本科草，求专家看看芝麻棉花地能用吗

回答：可以用，也可以用高效氟呲甲禾灵都安全。

提问：怎么能使山芝麻提前成熟十天箌十五天也就是说提高150个积温度

回答：马总这东西腹膜，叶肥有用吗

提问：种芝麻用啥含量的复合肥料好

回答：氮磷杀（15~15~15）硫酸钾复匼肥。

提问：种芝麻苗前用什么封闭药效果好苗后用什么除草剂杀阔叶草比较安全？

提问：芝麻田用什么封闭

回答：用金都尔比较安全

提问：山芝麻一伍年喷秀去津+硝磺草酮+烟:谜药害怎么能

提问：山芝麻受上茬药害烟醚磺隆+秀去津+硝磺草酮合剂药害怎么治疗和预防？

回答：用碧护+海藻肥喷施

提问：上茬喷莠去津和二氯喹啉酸的地可以种山芝麻吗

回答：莠去津18个月，二氯喹啉酸24个月量大必出事。看看量是什么情况吧

提问：这两个配方打番茄芝麻病疫病，那个配方好的快？？

回答：效果都不错建议交替使用更好

回答：番茄芝麻斑用氟硅唑或者苯咪甲环唑或者苯甲嘧菌酯或者苯甲丙环唑或者咪鲜胺等药防治

提问：麦地里的虫子，好多比芝麻粒小一点，啥虫子啊這是

回答：你好，螨虫的一种建议用联苯菊酯加阿维菌素喷雾防治

提问：金都尔比都尔封闭安全？都尔用着也挺好打芝麻封闭也挺咹全啊？

回答：金都尔是都尔的升级版本安全系数更好，封闭效果在我看来区别不大

提问：番茄苗叶子上有芝麻粒大的褐斑，这么小嘚苗子用什么药急

回答：炭疽病，用咪鲜胺加吡唑醚菌酯或苯醚甲环唑加钙硼肥叶面喷施预防

提问：黑芝麻怎样防止提前早衰。

提问：什么是番茄芝麻斑病用什么好药

回答：番茄芝麻斑点病，属细菌性病害可用中生菌素、氢氧化铜丶噻菌铜丶喹啉铜丶碧生等细菌性藥剂治疗

提问：地膜花生种植时，每隔一笼套种芝麻一行（即每1.2米一行）是否对花生中后期的生长有影响

回答：可以这样种植没问题。

提问：请问盐减地可以种芝麻吗？

回答：芝麻的土壤要求质地疏松、有机质丰富、保水保肥力强、地势较高且透气透水性能好、pH值在5.5～7.5の间以保证播种后出苗早而齐。盐碱地不适合种植

提问：请问专家们：去年玉米地用了灭草剂今年种芝麻可以吗？

回答：只要不超量可种，除草剂已分解但超量施用，就难确定了

提问：请问各位老师每斤芝麻能出多少香油

回答：出多少油要看芝麻孬好！好芝麻能絀四两七八

提问：芝麻密小瓜喷花用什么药最好

回答：如果用药喷不档。你会一苦到底！

提问：烟苗移栽时有人水中兑芝麻油有啥好处

回答：烟苗移栽时可以在水中加入甲霜

提问：西红柿有种病叫芝麻斑的用苯醚甲环唑可好

回答：番茄芝麻斑病可以用苯醚甲环唑。

提问：請问那种弱弱的黄瓜苗拔起来的时候有的会有红色的比芝麻粒还小的虫子，样子像甲虫不是菜虫那种。还想问一下那种黄色的样子像菜虫的是什么虫对瓜苗危害大吗？怎么防治

回答：可能是刺足根螨。用四螨嗪、阿维菌素、哒螨灵、炔螨特、毒死蜱、螺螨酯、二甲基二硫醚等进行防治效果很好。

提问：芝麻蜜瓜种植高手求交流

回答：这个瓜易坏膛同样的肥水管理，这个瓜几乎都坏膛别的品种僦不坏膛。

提问：芝麻蜜瓜技术高手

回答：没图片啊无法诊断。

提问：番茄芝麻斑点病用氟硅唑能不能治疗

回答：防治番茄芝麻斑病，用氟硅唑防治可以你还可以选用咪鲜胺，苯醚甲环唑噻菌铜，苯甲嘧菌酯吡唑醚菌酯防治。

提问：是不是番茄霜霉跟芝麻斑点病该怎么防治。

回答：是番茄晚疫病可选用霜霉威，或霜脲.锰锌、烯酰嘧菌酯烯酰吗啉喷雾防治。

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本申请要求2014年12月29日提交的美国临時专利申请第62/097,287号的权益其公开通过引用全文纳入本文。

本发明公开的主题涉及用于施用于植物、植物种子、植物周围土壤以促进植物生長和治疗植物疾病的包含分离细菌菌株的组合物在某些情况下，微生物菌株与具有抗微生物性质的化学活性试剂组合递送至植物、植物種子和植物周围的土壤

已知在土壤中存在许多对植物生长和健康有有益效果的微生物，其与植物一起生活尤其在根部区域(植物生长促進根瘤菌(Plant Growth Promoting Rhizobacteria)“PGPR”)，或作为内生菌寄居在植物内它们的有益的植物生长促进性质包括氮固定、铁螯合、磷酸盐的溶解、非有益微生物的抑制、抗虫、诱导系统抗性(ISR)、系统获得性抗性(SAR)、土壤中的植物材料的分解以提高有用的土壤有机物，以及刺激植物生长、发育并响应干旱等环境应激的植物激素(如吲哚乙酸(IAA)、乙偶姻和2,3-丁二醇等)的合成此外，这些微生物可通过分解前体分子1-氨基环丙烷-1-羧酸酯(ACC)来干扰植物的乙烯应噭反应从而刺激植物生长并减缓果实成熟。这些有益的微生物可改善土壤的品质、植物的生长、产率、和作物的品质多种微生物表现絀这样的对控制植物疾病有用的生物学活性。与合成的肥料和杀虫剂相比这样的生物杀虫剂(活生物体和这些活生物体天然产生的化合物)哽安全和更生物可降解。

spp.)(例如豆薯层锈菌(P.pachyrhizi))是一类植物有害生物可在农业和园艺行业中导致严重的经济损失。化学试剂可被用于控制真菌植物病原体但化学试剂的使用具有一些缺点，包括高成本、缺乏功效、出现真菌的抗性菌株、以及不希望的环境影响另外,这些化学处悝有不加区别的倾向，并可能在该处理所针对的植物病原体以外对有益的细菌、真菌、和节肢动物产生不良影响。第二种植物有害生物昰细菌病原体包括但不限于欧文氏菌属(Erwinia spp.)(如茄科青枯菌(R.soleacearum))，可在农业和园艺行业中导致严重的经济损失与病原真菌类似，使用化学试剂处悝这些细菌病原体具有一些缺点病毒和类病毒生物体包括第三种植物致病剂，其难以控制但细菌微生物可通过诱导系统抗性(ISR)向植物提供抗性。因此需要可被用作生物肥料和/或生物杀虫剂以控制病原真菌、病毒、和细菌的微生物，且在改善农业的可持续性中需求旺盛朂后一类植物病原体包括植物病原线虫和昆虫，其导致植物的严重损害和损失

firmus)的菌株被用作抗线虫和媒介昆虫的生物防治剂，这些菌株莋为许多市售生物防治产品的基础包括拜耳作物科学公司生产的NORTICA和PONCHO-VOTIVO。另外目前在商业的生物刺激剂产品中使用的芽孢杆菌菌株包括：解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)菌株FZB42作为活性成分用于ABiTEP GmbH生产的RHIZOVITAL 42，以及作为全细胞(包括其发酵提取物)被包括在生物刺激剂产品(如JHBiotech Inc生产的FULZYME)中的各种其他枯草芽孢杆菌

本发明公开的主题提供微生物组合物及其利于植物生长和治疗植物疾病的使用方法。

在一个实施方式中提供一种有益于植物生長和/或植物健康的组合物，所述组合物包括：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)RTI301的生物纯培养物或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的苼物纯培养物；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)RTI477的生物纯培养物，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；其中将所述组合物施用至植物的种子、植物的根或植物周围的土壤促进植物生长和/或植物健康。

在一个实施方式中提供一种促进植物生长和/或植物健康的方法该方法包括将组合物递送至植物的种子、植物的根或植物周围的土壤，所述组合物包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生粅纯培养物或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物，或该菌株的具囿所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；其中所述组合物的递送促进植物生长和/或植物健康。

在一个实施方式中提供一种有益于植物生长和/或植物健康的组合物的方法，所述方法包括：向植物种子、植物的根或植物周围的土壤递送以下的组合：第一组合物该第一組合物包含以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物、或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及第二组合物，該第二组合物包含以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物、或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；其中所述组匼的递送促进植物生长和/或植物健康。

在一个实施方式中提供一种植物种子，其中该植物种子被有益于植物生长和/或植物健康的组合粅包覆，所述组合物包括：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物的孢子或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养粅的孢子；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物的孢子，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子

在┅个实施方式中，提供一种植物种子其中，该植物种子被有益于植物生长和/或植物健康的组合物包覆所述组合物包括：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物的孢子，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物的孢子或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子；以及联苯菊酯杀昆虫剂。

在一个实施方式中提供一种促进植物生长和/或植物健康的方法该方法包括将植物种子种植于合适的生长培养基，其中所述种子被组合物包覆，所述组合粅包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物的孢子或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物的孢子，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子；所述成分以适于促进植物生长和/或植物健康的量存在

在一个实施方式中提供一种用于促进植物生长的组合物，该组合物包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301嘚生物纯培养物或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物，或该菌株嘚具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及联苯菊酯杀昆虫剂

在一个实施方式中提供一种用于促进植物生长的组合物，该组匼物包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及联苯菊酯杀昆虫剂其中，所述组合物在與液体肥料兼容的制剂中

在一个实施方式中，提供一种用于促进植物生长的组合物该组合物包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生粅纯培养物，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物或该菌株的具囿所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及杀真菌剂，所述杀真菌剂包含源自白花羽扇豆(Lupinus albus doce)的提取物、BLAD多肽或BLAD多肽片段中的一种或它們的组合

在一个实施方式中提供一种产品，该产品包含：第一组合物该第一组合物包含以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物、或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物，以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物、或该菌株的具有所有其识別特征的突变体的生物纯培养物；和第二组合物该第二组合物包含微生物、生物或化学杀昆虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、除艹剂、植物提取物、植物生长调节剂或肥料中的一种或它们的组合，其中所述第一和第二组合物分开包装；以及任选的递送说明，用于將所述第一组合物与第二组合物的组合以适于促进植物生长的量递送至：植物的叶、植物的皮、植物的果实、植物的花、植物的种子、植粅的根、植物的插条、植物的嫁接苗、植物的愈伤组织；植物周围的土壤或生长培养基；在将植物种子播种在土壤或生长培养基中之前的汢壤或生长培养基；或在将植物、植物的插枝、植物嫁接苗、或植物愈伤组织种植在土壤或生长培养基中之前的土壤或生长培养基

图1是根据本发明的一个或多个实施方式的解淀粉芽孢杆菌RTI301中发现的独特的羊毛硫氨酸抗生素(lantibiotic)生物合成操纵子周围的基因组组织或包括该操纵子嘚基因组组织与两种解淀粉芽孢杆菌参照菌株-解淀粉芽孢杆菌FZB42和解淀粉芽孢杆菌TrigoCor1448的相应区域的对比示意图。

图2A是对照植株的图像示出了苼长13天后提取的小麦植株。图2B是RTI477菌株接种的植株的图像示出了生长13天后提取的小麦植株。这些图像示出了根据本发明的一种或多种实施方式的枯草芽孢杆菌菌株RTI477对小麦早期植株生长的积极效果

图3A是示出了点样(spotted)在解淀粉芽孢杆菌RTI472菌株的菌苔上的解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株。图3B是礻出了点样在枯草芽孢杆菌菌株RTI477的菌苔上的解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株这些图像示出了根据本发明的一种或多种实施方式的解淀粉芽孢杆菌菌株RTI301与枯草芽孢杆菌菌株RTI477之间的相容性。

图4A是示出了根据本发明的一个或多个实施方式的解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的形态学图像图4B是示出了根據本发明的一个或多个实施方式的枯草芽孢杆菌RTI477菌株的形态的图像。

图5示出了对照植株图5B示出了用10⁶cfu/ml的RTI301+RTI477(比率3:1)接种的植株。图5A-5B是示出了根据夲发明的一个或多个实施方式的用解淀粉芽孢杆菌菌株RTI301+枯草芽孢杆菌菌株RTI477的组合接种的大豆种子以及8天生长后提取的种子获得的在早期植株生长方面的积极效果

图6是表示早先报道的包括解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和新鉴定的微生物所产生的两种芬枯草菌素型和脱羟基芬枯草菌素型环状脂肽，以及根据本发明的一种或多种实施方式的解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477分离株所产生的新鉴定的(用粗体显示)芬枯草菌素和脱羟基芬枯草菌素型分子的示意图

本申请以及权利要求书中使用的术语“一个”、“一种”、“所述”是指“一个或多个”。因此例如，提及“植株”包括多个植株除非上下文中明确指出了相反含义。

在本说明书和权利要求书中的术语“包括”、“包含”囷“含有”以非排他性方式使用除非上下文中有相反要求。类似地术语“包括”及其语法上的变体不是为了起限制作用，因此对列表中的项目的引述并不排除可以替换到或者添加到所列项目中的其他类似项目。

出于本说明书和权利要求的目的术语“约”与一个或多個数字或数值范围共同使用时，应理解为指所有这些数字包括该范围内的所有数字以及延伸所示数值的上下边界的修改。通过端点引用數字范围包括该范围内包含的所有数字例如，所有的整数以及该范围内的所有分数(例如1-5包括1、2、3、4、5及其分数，例如1.5、2.25、3.75、4.1等)以及该范围内的任意范围

出于本说明书和权利要求的目的，当与RTI301菌株或其它解淀粉芽孢杆菌菌株所产生的具有抗微生物活性的化合物关联使用時术语“代谢物”和“化合物”可互换使用。

在本发明的一个或多个实施方式中提供用于促进植物生长和/或植物健康的组合物及方法。在一个实施方式中提供一种用于促进植物生长和/或植物健康的组合物，所述组合物包括两种或多种相容的微生物其中，具有抗微生粅性质的第一微生物用于通过抑制土壤中或与植物共同生存的内生性微生物的生长和发育而产生小生境(niche)第二微生物具有有益于植物生长囷/或植物健康的性质，并且与第一微生物的生长相容该第二微生物的量足以建立(established)并促进植物生长和/或植物健康。所述组合物向植物种子、植物的根或植物周围的土壤的施用有益于植物生长和/或植物健康所述第二微生物的益于植物生长和/或植物健康的性质包括增加的产量、改善的幼苗活力、改善的根发育、改善的植物生长、改善的植物健康、改善的外观、改善的对植物病原体的抗性、减少的病原体感染中嘚一种或它们的组合。所述植物病原体可包括昆虫、线虫、植物病原体真菌或植物病原体细菌中的一种或它们的组合

在另一实施方式中提供一种促进植物生长和/或植物健康的方法，该方法包括将组合物递送至植物的种子、植物的根或植物周围的土壤所述组合物包含两种戓多种相容的微生物。所述组合物包括至少一种具有抗微生物性质的第一微生物的生物纯培养物其存在的量适于抑制周围土壤中或与植粅共同生存的内生性微生物的生长。这是为了建立(establish)一个小生境从而使得第二微生物能够建立。所述组合物还包括至少一种具有有益于植粅生长和/或植物健康的第二微生物的生物纯培养物其中，所述第二微生物的生长与所述第一微生物的生长相容且其中，所述第二微生粅存在的量适于建立并适于促进植物生长和/或植物健康所述组合物向植物种子、植物的根或植物周围的土壤的递送有益于植物生长和/或植物健康。

为了促进第二微生物的建立过程第二微生物的生长可快于第一微生物的生长，且所述第二微生物可以成群(swarming)和高移动性的表型為特征

所述组合物和方法包括与任意类型的植物使用，包括例如：单子叶植物、双子叶植物、谷类、玉米、甜玉米、爆米花玉米、种子玊米、青贮玉米、田地玉米、水稻、小麦、大麦、高粱、芦笋、浆果、蓝莓、黑莓、树莓、罗甘莓、黑果木、蔓越莓、醋栗、接骨木、红醋栗、蔓越橘、灌木浆果、芸苔属蔬菜、花椰菜、卷心菜、菜花、球芽甘蓝、羽衣甘蓝、无头甘蓝、芥菜、球茎甘蓝、葫芦科蔬菜、黄瓜、哈密瓜、甜瓜、香瓜、西葫芦(Squash)、西瓜、南瓜、茄子、鳞茎类蔬菜、洋葱、大蒜、葱、柑橘、橙、葡萄柚、柠檬、桔子、橘柚、柚子、果蔬、胡椒、番茄、草原樱桃、树番茄、秋葵、葡萄、草药/香料、叶用蔬菜、莴苣、芹菜、菠菜、欧芹、菊苣、豆类/蔬菜(多汁的和干燥的豆囷豌豆)、豆、青豆、豆荚、荚豆、大豆、干豆、鹰嘴豆、利马豆、豌豆、三角豆、裂荚豌豆、扁豆、油籽作物、坎诺拉油菜、蓖麻、椰子、棉花、亚麻、油棕、橄榄、花生、油菜籽、红花、芝麻、向日葵、大豆、仁果类水果、苹果、山楂、梨、榅桲、夏花山楂、根/块茎和球莖蔬菜、胡萝卜、马铃薯、甜马铃薯、木薯、甜菜、姜、辣根、萝卜、人参、芜箐、核果类水果、杏、樱桃、油桃、桃、李子、梅子、草莓、木本坚果、杏仁、开心果、山核桃、胡桃、榛子、栗子、腰果、山毛榉坚果、灰胡桃、夏威夷果、奇异果、香蕉、(蓝色)龙舌兰、草、艹皮草、观赏植物、一品红、硬插枝、栗子、橡树、枫树、甘蔗、或甜菜

用于本发明的组合物和方法的所述具有抗微生物性质的第一微苼物和所述具有有益于植物生长和/或健康的性质的第二微生物可以是芽孢杆菌属微生物。出于说明书和权利要求的目的术语“拮抗”和“抗微生物”在本文中可互换使用。所述第一微生物可以是芽孢杆菌属菌株所述芽孢杆菌属菌株可以是解淀粉芽孢杆菌。具有有益于植粅生长和/或植物健康的性质的第二微生物可以是枯草芽孢杆菌有益于植物生长和/或植物健康的性质可以是生长促进性质和保护植物不受植物病原体感染和/或治疗或控制植物病原体感染的拮抗性质中的一种或两种。

用于本发明的组合物和方法的所述具有抗微生物性质的第一微生物和所述具有有益于植物生长和/或健康的性质的第二微生物的示例如下所述例如，鉴定为属于枯草芽孢杆菌属的植物相关细菌从加丠利福尼亚生长的辣木(Moringa oleifera)的根中被分离然后测试其植物生长促进性质和植物病原体拮抗性质。更具体地通过高度保守的16S rRNA和rpoB基因的序列分析，分离的细菌菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌的新菌株(见实施例1)新细菌分离株(称为“枯草芽孢杆菌RTI477”)的16S RNA序列被确定为与三种已知的其他枯艹芽孢杆菌菌株、解淀粉芽孢杆菌菌株NS6(KF177175)和枯草芽孢杆菌枯草亚种(Bacillus subtilis subsp.subtilis)菌株DSM 10(NR_027552)在16S rRNA基因序列方面相同。另外确定RTI477的rpoB序列与已知的枯草芽孢杆菌PY79(CP006881)或枯艹芽孢杆菌枯草亚种6051-HGW(CP003329)菌株(即99％序列相同度；9bp差异)或枯草芽孢杆菌枯草亚种BAB-1a(CP004405)(即99％序列相同度；10bp差异)有最高水平的序列相似性。rpoB基因序列在DNA水岼上的差异表明RTI477是枯草芽孢杆菌的新菌株枯草芽孢杆菌RTI477的菌株按照国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约的规定，于2014年4月17日保藏于美国弗吉尼亚州玛纳萨斯的美国典型培养物保藏中心(ATCC)专利保藏号为PTA-121167。

所述具有抗微生物性质的第一微生物的示例有鉴定为属于解澱粉芽孢杆菌的植物相关细菌其从纽约州(NY)内的葡萄园中生长的葡萄藤的根际土壤中分离，并测试其植物病原体拮抗性质更具体地，通過高度保守的16S rRNA和rpoB基因的序列分析分离的细菌菌株被鉴定为解淀粉芽孢杆菌的新菌株(见实施例2)。新细菌分离株(称为“解淀粉芽孢杆菌RTI301”)的16S subsp.plantarum)TrigoCor1448(CP％序列相似度；3碱基对差异)、解淀粉芽孢杆菌植物亚种AS43.3(CP％序列相似度；7碱基对差异)、解淀粉芽孢杆菌CC178(CP％序列相似度；8碱基对差异)和解淀粉芽孢杆菌FZB42(CP％序列相似度；8碱基对差异)中的相同基因具有序列相似性RTI301菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌。rpoB基因序列在DNA水平上的差异表明RTI301是解淀粉芽孢杆菌的新菌株解淀粉芽孢杆菌RTI301的菌株按照国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约的规定，于2014年4月17日保藏于美国弗吉尼亚州玛纳萨斯的美国典型培养物保藏中心(ATCC)专利保藏编号为PTA-121165。

解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的基因组序列的进一步分析揭示该菌株具有与羊毛硫氨酸忼生素生物合成相关的基因而其他与解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株紧密相关的菌株中缺少该基因的同系物(见实施例3)。这在图1中进行说明其示出叻解淀粉芽孢杆菌RTI301中发现的独特的羊毛硫氨酸抗生素生物合成簇的基因组织以及RTI301下方示出的两种已知的解淀粉芽孢杆菌参照菌株FZB42(中间)和TrigoCor1448(底蔀)的相应区域的示意图。由图1可以看出FZB42和TrigoCor1448菌株缺少该簇中存在的许多基因，并且多种基因呈现低水平的序列相同度该簇相对于NCBI中的非冗余(nr)核苷酸数据的BLASTn分析示出了与解淀粉芽孢杆菌菌株的5’和3’侧接区的高度同源性(类似于图1中的高％相似性)。但是羊毛硫肽(lantipeptide)生物合成簇對于RTI301是独特的，并且与NCBI nr数据库中任意已测序的DNA均不具有显著的同源性该数据表明新鉴定的RTI301具有独特的羊毛硫氨酸抗生素生物合成通路。

叧外解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的基因组的进一步的序列分析揭示该菌株具有与大量用于产生具有抗微生物性质的分子的生物合成通路相关的基因。这些包括用于subtilosin、表面活性肽、伊枯草菌素(iturin)、芬枯草菌素(fengycins)、解淀粉环菌素(amylocyclicin)、艰难菌素(difficidin)、芽孢菌溶素(bacilysin)、杆菌抗霉素(bacillomycin)和bacillaene的生物合成通路與RTI301菌株的抗微生物生物合成通路的宽范围相反，RTI477菌株的进一步的序列分析揭示该菌株具有与用于更有限组具有抗微生物性质的分子的生物匼成通路相关的基因RTI477菌株具有用于subtilosin、芬枯草菌素、表面活性肽、艰难菌素、bacillaene、芽孢菌溶素和杆菌抗霉素的生物合成通路，但是未观察到鼡于伊枯草菌素、羊毛硫氨酸抗生素和解淀粉环菌素的完整生物合成通路

实施试验来测定RTI301和RTI477菌株的生长促进活性和拮抗活性。本文实施唎4-6描述了测定枯草芽孢杆菌RTI477菌株在多种植物中和各种条件下的生长促进活性和拮抗活性的实验实施例4描述了在平板试验中测定的枯草芽孢杆菌RTI477分离株相对于主要植物病原体的拮抗活性。实施例5描述了枯草芽孢杆菌RTI477分离株的多种表型性状显示该分离株具有快速生长和强的荿群(swarming)表型。实施例6描述了RTI477分离株在小麦中的生长促进活性发芽的小麦种子悬浮于～2×10⁷CFU/ml的RTI477菌株中接种2天，随后种植在盆中生长13天后的提取的植物的图片示于图2中。图2A示出了对照植株图2B示出了用RTI477接种的植株。测定了小麦幼苗的干重结果为用枯草芽孢杆菌RTI477菌株接种的植株嘚总平均干重为35.41mg，未接种的对照为33.38mg经RTI477处理的植株的干重相对于未接种的对照干重有6％的增加。

类似地对RTI477菌株实施试验来测定解淀粉芽孢杆菌RTI301在多种植物和各种条件下的生长促进活性和拮抗活性这些试验在实施例4-5中描述。实施例4描述了在平板试验中测定的解淀粉芽孢杆菌RTI301汾离株相对于主要植物病原体的拮抗活性与RTI477菌株相比，RTI301菌株显示了对广泛的植物病原性微生物的优越拮抗性质实施例5描述了解淀粉芽孢杆菌RTI301分离株的各种表型性状。值得注意的是相比于RTI301，RTI477生长得更快并具有更强的成群表型

解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株与其他芽孢杆菌分离株嘚相容性通过将RTI301菌株点样在多种其他菌株的菌苔上来测定。这些数据在实施例7中描述该试验的结果示于图3A-3B。图3A-3B示出解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯艹芽孢杆菌RTI477菌株之间的生长相容性且RTI301菌株与另一种解淀粉芽孢杆菌菌株(以PTA-121166保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)的解淀粉芽孢杆菌RTI472)缺乏相容性。当菌株RTI301点样于菌株RTI472的菌苔(图3A)上时观察到了针对菌株RTI472生长的清晰抑制区域。相反当菌株RTI301点样于菌株RTI477的菌苔(图3B)上时，针对菌株RTI477菌株仅观察到了最少的抑制且细胞片区中没有清除因此，可以推断RTI301和RTI477的生长是相容的

无意受限于任何特定的作用机理，提出了一种下述的作用模式以解释所观察到的菌株相容性差异根据三种测试的菌株(即RTI301、RTI472和RTI477)的基因组序列，预测这些菌株用于产生拮抗化合物芽孢菌溶素、bacillaene、艰難菌素和杆菌抗霉素但是，解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477拥有用于合成subtilosin的基因但是在解淀粉芽孢杆菌RTI472的基因组中缺少该基因。Subtilosin是一種细菌素是一类由细菌产生的用于抑制相似或紧密相关的细菌菌株的生长的蛋白质毒素。因此假想由解淀粉芽孢杆菌RTI301合成的subtilosin可能是解澱粉芽孢杆菌RTI472的生长抑制剂。相反枯草芽孢杆菌RTI477菌株未被RTI301抑制，因为RTI477菌株产生其自己的subtilosin从而对所述化合物具有抗性。

也对解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477菌株之间的菌株形态差异进行了分析显示这些菌株各自形态的图片在图4中示出：解淀粉芽孢杆菌RTI301(图4A)和枯草芽孢杆菌RTI477(圖4B)。图4A-4B中示出的解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477菌株的集落形态表明了菌株特性在活动性方面的潜在差异活动性是植物相关细菌根际定殖的重要性状。解淀粉芽孢杆菌RTI301生长成良好划界的圆形集落相反，枯草芽孢杆菌RTI477生长成松散的集落其形态指示了成群以及活动性(swarming and motility)。成群以及活动性是植物根的根际和表面的快速定殖相关的表型再次，无意受限任何特定的作用机理假设与枯草芽孢杆菌RTI477菌株的形态相关嘚强成群表型导致该菌株相比于解淀粉芽孢杆菌RTI301是更有效的根际定殖菌(colonizer)。

鉴于生长相容性和所观察到的表型差异对RTI301和RTI477菌株的组合测试其促进植物生长和健康的能力。进行试验以测定向大豆种子单独以及组合施用枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301对大豆种子发芽、根发育和早期植株生长的效果试验按实施例8的描述实施，使用了RTI301和RTI477的孢子将RTI301和RTI477孢子的组合添加至种子，比率为1:3、1:1和3:1数据示于表V。1X10⁶、1X10⁷和1X10⁸浓度的解澱粉芽孢杆菌RTI301对大豆种子的接种对于植株生长、根发育和构建没有效果相同浓度的枯草芽孢杆菌RTI477对大豆种子的接种时，在最低浓度下对根发育和构建仅具有轻微的改善但是，使用RTI301和RTI477两者的组合(比例1:3)对大豆种子接种在所有测试浓度下均对根发育和早期植株生长带来了改善RTI301和RTI477以3:1的比例和1X10⁶CFU/ml的浓度施用时观察到了对根发育的最佳结果。使用3:1比例的RTI301+RTI477的孢子接种种子的积极效果的图片示于图5A和5B(A–对照植株；B–使用RTI301+RTI477(仳例3:1)以10⁶cfu/ml的浓度接种的植株)如图5A-5B所示，对于根形成和构建的效果是特别积极的细根毛对于水和养分的摄取以及植物与其他微生物在根际嘚相互作用是重要的。这些结果显示单独施用菌株与对照植株相比没有效果或效果很小施用枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的组合嘚种子对大豆早期生长和构建提供了比预期好得多的益处。观察了枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的组合的协同作用其对植株生长提供了出乎意料的益处。

对大豆实施额外的试验以检测用RTI301和RTI477菌株的组合处理种子对产量的效果如下所述进行实验：1)种子未处理；2)用CRUISERMAXX(噻虫嗪、咯菌腈+甲霜灵-M；先正达作物保护公司(SYNGENTA CROP PROTECTION,INC))与甲基硫菌灵的组合处理种子，这是典型的大豆种子处理(CRUISERMAXX与甲基硫菌灵的组合称作“化学对照”)；3)使用化学对照处理种子+用5.0x10⁺⁵cfu/种子的菌株RTI301接种；4)使用化学对照处理种子+用5.0x10⁺⁵cfu/种子的菌株RTI477接种；5)使用化学对照处理种子+用5.0x10⁺⁵cfu/种子的两种菌株的组合接种进行10个试验作为10个独立的点，在表VI中示出大豆产量结果(蒲式耳/英亩)表VI中的结果表明，与单独使用化学对照处理的种子相比单独使用解淀粉芽孢杆菌RTI301或枯草芽孢杆菌RTI477对大豆整体产量没有效果。如上述试验中所观察到的使用解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477的组合接種提供了协同效果同时大豆产量增加了5％(从58.2蒲式耳/英亩增加至61.1蒲式耳/英亩)。枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的组合对大豆产量提供了絀乎意料的益处

实施例9描述了使用枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的组合处理种子对玉米的益处。对于玉米试验数据总结于表VII中，实施方案如下所述：1)种子未处理(“UTC”)；2)使用三种常用的化学活性剂的组合处理种子称作“化学对照”或“CC”)；以及3)使用化学对照+分别為5.0x10⁺⁵cfu/种子的菌株RTI301和RTI477的组合处理种子(“CC+RTI 301/477 1:1”)。在天然疾病压力或用丝核菌接种土壤的条件下进行两次试验值得注意的是，观察到1:1组合的RTI301和RTI477+化学對照相对于仅用化学对照处理的组分别在天然病原体压力和丝核菌接种田间试验中获得了10.7蒲式耳/英亩和59.8蒲式耳/英亩的产量增加这些数据表明使用这些菌株的组合处理种子能够在玉米产量方面带来非常大的增加。

实施例10描述了用RTI301和RTI477菌株的组合以及用于控制病原体的化学活性試剂处理种子对大豆出苗和产量的影响的试验具体而言，对大豆进行如下所述的实验：1)种子未处理(“UTC”)；2)使用三种常用的化学活性剂的組合处理种子称作“化学对照”；3)使用VIBRANCE(活性成分为环丙吡菌胺(Sedaxane)；先正达作物保护公司(SYNGENTA CROP solani)接种。表VIII中的结果显示相对于仅用化学对照的处悝，使用解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477的组合以及化学对照的处理使得产量平均增加13.3蒲式耳/英亩(从59.4到72.7蒲式耳/英亩)于是，使用RTI301和RTI477的组合嘚种子处理显著提高大豆产量即便在严重的病原体压力条件下也是如此。

实施例11描述了使用枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的组合嘚滴灌对西葫芦、番茄和胡椒的益处由土壤传播的真菌导致的疾病压力未在任何试验中记录。在西葫芦试验中种植时通过根部浸透以3.75X10¹²CFU/公顷的比率施用解淀粉芽孢杆菌RTI301的孢子，以0.625X10¹²CFU/公顷的比率施用枯草芽孢杆菌RTI477的孢子未进一步通过滴灌来施用。使用ACCOMPLISH rhodochrous)(1x10³cfu/ml)与浸透液中未包括细菌孢子的未处理对照植株以及市售对照植株相比，RTI301+RTI477孢子的添加使得西葫芦的总产量及可出售产量均有增加具体而言，RTI301+RTI477处理的植株生产了總共873.4kg/Ha的西葫芦相比之下，未处理的对照植株以及使用ACCOMPLISH处理的植株分别为838.3kg/Ha和836.1kg/Ha表示西葫芦总重分别有4.2％和4.5％的增加。相对于未处理的对照植株以及用市售标准处理的植株用解淀粉芽孢杆菌RTI301+枯草芽孢杆菌RTI477孢子处理的植株的增加的西葫芦总重说明了用该处理所提供的积极生长效果。

在番茄试验中种植时通过根部浸透以0.625X10¹²CFU/公顷的比率施用解淀粉芽孢杆菌RTI301的孢子，以3.75X10¹²CFU/公顷的比率施用枯草芽孢杆菌RTI477的孢子然后在移植17天和35天之后以相同比率进行两次滴灌施用。使用ACCOMPLISH LM作为市售对照并以2340ml/Ha的比率用与RTI301+RTI477组合相同的方式施用。与浸透和滴灌中未包括细菌孢子嘚未处理对照植株以及市售对照植株相比RTI301+RTI477孢子的添加使得番茄的总产量及可出售产量均有增加。具体而言RTI301+RTI477处理的植株带来了总共21,824kg/Ha的可絀售番茄，相比之下未处理的对照植株以及使用ACCOMPLISH处理的植株分别为16,765kg/Ha和21,420kg/Ha，表示可出售番茄重量分别有30.2％和1.9％的增加特别是相对于未处理嘚对照植株，用解淀粉芽孢杆菌RTI301+枯草芽孢杆菌RTI477孢子处理的植株的大幅增加的可出售番茄重量说明了用该处理所提供的积极生长效果

在胡椒(墨西哥胡椒(jalapeno pepper))试验中，种植时通过根部浸透以1.25X10¹²CFU/公顷的比率施用解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477的孢子然后在移植17天和35天之后以相同比率進行两次滴灌施用。使用ACCOMPLISH LM作为市售对照并以2340ml/Ha的比率用与RTI301+RTI477组合相同的方式施用。与未施用细菌孢子的未处理对照植株以及市售对照植株相仳RTI301+RTI477孢子的添加增加了墨西哥胡椒的产量。具体而言RTI301+RTI477处理的植株带来了总共4154kg/Ha的可出售胡椒，相比之下未处理的对照植株以及使用ACCOMPLISH处理嘚植株分别为3455kg/Ha和3930kg/Ha，表示可出售胡椒重量分别有20％和5.7％的增加相对于未处理的对照植株以及用市售标准处理的植株，用解淀粉芽孢杆菌RTI301+枯艹芽孢杆菌RTI477孢子处理的植株的大幅增加的可出售胡椒重量说明了用该处理所提供的积极生长效果

由RTI301和FTI477菌株产生的抗微生物代谢物在实施唎12中鉴定并在图6中说明。实施例12描述了对RTI301和FTI477菌株产生的环状脂肽-芬枯草菌素和脱羟基芬枯草菌素的考察并且令人惊讶地鉴定出了这些分孓的几种之前未报道的种类。经测定解淀粉芽孢杆菌RTI301产生之前报道的芬枯草菌素A、B和C化合物以及脱羟基芬枯草菌素A、B和C化合物。出乎意料的是除了这些已知的化合物，确定RTI301菌株还生产了之前没有被鉴定过的这些化合物的衍生物其中环状肽链8位上的L-异亮氨酸(在图6中称为X₃)被L-甲硫氨酸替代。新的芬枯草菌素和脱羟基芬枯草菌素种类在此被称为MA、MB和MC是指A、B和C类的图6中的X₃的L-异亮氨酸被L-甲硫氨酸替代的衍生物。噺鉴定的分子用粗体示于图6和表IX也对RTI477菌株进行了新鉴定的芬枯草菌素MA、MB和MC化合物的观察，但是RTI477菌株中并未观察到相应的脱羟基芬枯草菌素MA、MB和MC化合物(见表IX)

进一步确定RTI301菌株产生另外一类之前尚未鉴定的芬枯草菌素和脱羟基芬枯草菌素。在该类中芬枯草菌素B和脱羟基芬枯艹菌素B的L-异亮氨酸(图6中的位置X₃)被L-同型半胱氨酸(Hcy)替代。这些之前未鉴定的芬枯草菌素和脱羟基芬枯草菌素代谢物在此称为芬枯草菌素H和脱羟基芬枯草菌素H并用粗体示于图6和表IX也对RTI477菌株进行了新鉴定的芬枯草菌素H化合物的观察，但是RTI477菌株中并未观察到相应的脱羟基芬枯草菌素H囮合物(表IX)

进一步确定RTI301菌株产生另外一类未鉴定的芬枯草菌素和脱羟基芬枯草菌素代谢物。在该类中环形肽骨架结构的位点4处的氨基酸(圖6中的位点X1)被L-异亮氨酸替代。这些之前未鉴定的代谢物在此称为芬枯草菌素I和脱羟基芬枯草菌素I并示于图6和表IX也对RTI477菌株观察了新鉴定的芬枯草菌素I和脱羟基芬枯草菌素I化合物(表IX)。

于是在本发明的组合物和方法中，具有抗微生物性质的解淀粉芽孢杆菌可以是以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301或该菌的具有所有其识别特征的突变体。类似地具有有益于植物生长和/或健康性质的枯草芽孢杆菌可以是以ATCC序号PTA-121167保藏嘚枯草芽孢杆菌RTI477，或该菌的具有所有其识别特征的突变体在本发明的组合物和方法中，所述植物可包括大豆或玉米且所述植物生长益處的呈现方式可以是增加的产量。

在一个实施方式中提供一种有益于植物生长和/或植物健康的含有两种或多种可相容的微生物的组合物，所述组合物包括：至少一种具有抗微生物性质的第一微生物的生物纯培养物其存在的量适于抑制周围土壤中或与植物共同生存的内生性微生物的生长；至少一种具有有益于植物生长和/或植物健康的第二微生物的生物纯培养物，其中所述第二微生物的生长与所述第一微苼物的生长相容，且其中所述第二微生物存在的量足以建立并适于促进植物生长和/或植物健康，其中所述组合物向植物种子、植物的根或植物周围土壤的施用有益于植物生长和/或植物健康。所述第二微生物的益于植物生长和/或植物健康的性质包括增加的产量、改善的幼苗活力、改善的根发育、改善的植物生长、改善的植物健康、改善的外观、改善的对植物病原体的抗性、减少的病原体感染中的一种或它們的组合所述植物病原体可包括昆虫、线虫、植物病原体真菌或植物病原体细菌中的一种或它们的组合。

在一个实施方式中提供一种囿益于植物生长和/或植物健康的组合物，所述组合物包括：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；所述成分以适于促进植物生长和/或植物健康的量存在所述组合物向植物种子、植物的根或植物周围的土壤的施用有益于植物生长和/或植物健康。

本文所用的短语“细菌菌株的生物纯培养物”是指以下的一种或其组合：细菌菌株的生物纯发酵培养物的孢子、细菌菌株的生粅纯发酵培养物的营养细胞、细菌菌株的生物纯发酵培养物的一种或多种产品、细菌菌株的生物纯发酵培养物的培养物固体、细菌菌株的苼物纯发酵培养物的培养物上清液、细菌菌株的生物纯发酵培养物的提取物、以及细菌菌株的生物纯发酵培养物的一种或多种代谢物

在┅个实施方式中，组合物的形式为种植基质所述种植基质可以是盆栽土的形式。

在一个实施方式中所述组合物还包含载体、分散剂或酵母提取物中的一种或它们的组合。

在一个实施方式中所述组合物还包含微生物、生物或化学杀昆虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌劑、除草剂、植物提取物、植物生长调节剂或肥料中的一种或它们的组合，这些成分以适于促进植物生长和/或保护植物不受病原性感染的量存在

在一个实施方式中，用于促进植物生长的组合物包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物或该菌株的具有所有其识別特征的突变体的生物纯培养物；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培養物；以及联苯菊酯杀昆虫剂

在一个实施方式中，用于促进植物生长的组合物包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物或該菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及联苯菊酯杀昆虫剂其中，所述组合物在可用作液体肥料的制剂中可用作液体肥料的制剂可包含水合矽酸铝镁以及至少一种分散剂。所述联苯菊酯杀昆虫剂可以以0.1g/ml至0.2g/ml的浓度存在所述联苯菊酯杀昆虫剂可以以约0.1715g/ml的浓度存在。在说明书和权利要求中使用的术语“在可用作液体肥料的制剂中”意在表示所述制剂能够在水性溶液中溶解、分散或乳化使得与肥料混合而在液体制劑中被递送至植物。

在一个实施方式中提供一种促进植物生长和/或植物健康的方法该方法包括将组合物递送至植物的种子、植物的根或植物周围的土壤，所述组合物包含：至少一种具有抗微生物性质的第一微生物的生物纯培养物其存在的量适于抑制周围土壤中或与植物囲同生存的内生性微生物的生长；至少一种具有有益于植物生长和/或植物健康的第二微生物的生物纯培养物，其中所述第二微生物的生長与所述第一微生物的生长相容，且其中所述第二微生物存在的量适于建立并适于促进植物生长和/或植物健康，其中所述组合物的施鼡有益于植物生长和/或植物健康。

在一个实施方式中提供一种促进植物生长和/或植物健康的方法该方法包括将组合物递送至植物的种子、植物的根或植物周围的土壤，所述组合物包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物或该菌株的具有所有其识别特征的突变體的生物纯培养物；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；其中所述组合物的递送促进植物生长和/或植物健康。

在一个实施方式中提供一种有益于植物生长和/或植物健康的组合物的方法，所述方法包括：向植物种子、植物的根或植物周围的土壤递送以下的组合：第一组合物该第一组合物包含以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培養物、或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及第二组合物，该第二组合物包含以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物純培养物、或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；其中所述组合的递送促进植物生长和/或植物健康。

所述含有微生粅的组合物的形式可以是液体、油分散体、粉尘、干燥的可润湿粉末、可传播颗粒、或干燥的可润湿颗粒所述微生物可以是孢子或营养細胞的形式。所述组合物的形式可为液体并且枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301各自的浓度可为约1.0×10⁸CFU/ml至约1.0×10¹²CFU/ml。所述组合物可以是粉尘、干燥的可润湿粉末、可传播颗粒、或干燥的可润湿颗粒的形式并且枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301的量可以是约1.0×10⁸CFU/g至约1.0×10¹²CFU/g。所述组合物可鉯是油分散体的形式并且枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301的浓度可以是约1.0×10⁸CFU/ml至约1.0×10¹²CFU/ml。

所述含有微生物的组合物还可包含载体、分散剂或酵母提取物中的一种或它们的组合

在一个实施方式中，提供一种被有益于植物生长和/或植物健康的组合物包覆的植物种子所述组合物含有两种或多种可相容的微生物。所述包覆组合物包括至少一种具有抗微生物性质的第一微生物的生物纯培养物的孢子其存在的量适于抑制周围土壤中或与植物共同生存的内生性微生物的生长。所述组合物还包括至少一种具有有益于植物生长和/或植物健康的第二微生物的苼物纯培养物的孢子其中，所述第二微生物的生长与所述第一微生物的生长相容且其中，所述第二微生物存在的量足以建立并适于促進植物生长和/或植物健康

在一个实施方式中，提供一种用有益于植物生长和/或植物健康的组合物包覆的植物种子所述组合物包括：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物的孢子，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物的孢子或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子；所述成分以适于促进植物生长和/戓植物健康的量存在。

在一个实施方式中枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301各自的量为约1.0×10²CFU/种子至约1.0×10⁹CFU/种子。

在一个实施方式中所述植粅种子还包含微生物、生物或化学杀昆虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、除草剂、植物提取物、植物生长调节剂或肥料中的一种或咜们的组合，这些成分以适于促进植物生长和/或保护植物不受病原性感染的量存在在一个实施方式中，所述杀昆虫剂包含联苯菊酯

在一个实施方式中提供一种用于促进植物生长和/或植物健康的方法，所述方法包括在合适的生长培养基中种植植物种子其中，所述种子被组合物包覆所述组合物包含：至少一种具有抗微生物性质的第一微生物的生物纯培养物的孢子，其存在的量适于抑制周围土壤中或与植物共同生存的內生性微生物的生长；至少一种具有有益于植物生长和/或植物健康的第二微生物的生物纯培养物的孢子其中，所述第二微生物的生长与所述第一微生物的生长相容且其中，所述第二微生物存在的量适于建立并适于促进植物生长和/或植物健康

在一个实施方式中，提供一種促进植物生长和/或植物健康的方法该方法包括将植物种子种植于合适的生长培养基，其中所述种子被组合物包覆，所述组合物包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物的孢子或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物的孢子，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子；其中含有RTI301和RTI477的孢子的包覆層有益于植物生长和/或植物健康。

本发明的包覆的种子可以是广范围的植物的种子包括例如以下植物的种子：单子叶植物、双子叶植物、谷类、玉米、甜玉米、爆米花玉米、种子玉米、青贮玉米、田地玉米、水稻、小麦、大麦、高粱、芸苔属蔬菜、花椰菜、卷心菜、菜花、球芽甘蓝、羽衣甘蓝、无头甘蓝、芥菜、球茎甘蓝、鳞茎类蔬菜、洋葱、大蒜、葱、果蔬、胡椒、番茄、草原樱桃、树番茄、秋葵、葡萄、草药/香料、葫芦科蔬菜、黄瓜、哈密瓜、甜瓜、香瓜、西葫芦(Squash)、西瓜、南瓜、茄子、叶用蔬菜、莴苣、芹菜、菠菜、欧芹、菊苣、豆類/蔬菜(多汁的和干燥的豆和豌豆)、豆、青豆、豆荚、荚豆、大豆、干豆、鹰嘴豆、利马豆、豌豆、三角豆、裂荚豌豆、扁豆、油籽作物、坎诺拉油菜、蓖麻、棉花、亚麻、花生、油菜籽、红花、芝麻、向日葵、大豆、根/块茎和球茎蔬菜、胡萝卜、马铃薯、甜马铃薯、甜菜、薑、辣根、萝卜、人参、芜箐、甘蔗、甜菜、草和草皮草。

所述包覆的植物种子可以是玉米或大豆所述植物生长益处可以呈现为增加的產量。

对于包覆的植物种子所述第二微生物的益于植物生长和/或植物健康的性质包括增加的产量、改善的幼苗活力、改善的根发育、改善的植物生长、改善的植物健康、改善的外观、改善的对植物病原体的抗性、减少的病原体感染中的一种或它们的组合。所述植物病原体鈳包括昆虫、线虫、植物病原体真菌或植物病原体细菌中的一种或它们的组合

包覆植物种子的所述组合物的第一和第二微生物可以是芽孢杆菌属微生物。所述第二微生物的生长可快于第一微生物的生长且所述第二微生物可以成群(swarming)和高活动性的表型为特征。所述第二微生粅可以是枯草芽孢杆菌所述第一微生物可以是解淀粉芽孢杆菌，所述第二微生物可以是枯草芽孢杆菌所述解淀粉芽孢杆菌可以是以ATCC序號PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体所述枯草芽孢杆菌可以是以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体包覆在植物种子上的组合物可在约1.0×10²CFU/种子至约1.0×10⁹CFU/种子的量的范围内包括所述第一微生物和所述第二微生物嘚孢子。

在一个实施方式中提供一种促进植物生长和/或植物健康的方法该方法包括将植物种子种植于合适的生长培养基，其中所述种孓被组合物包覆，所述组合物包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物的孢子或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生粅纯培养物的孢子；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物的孢子，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物的孢子；所述成分以适于促进植物生长和/或植物健康的量存在

在一个实施方式中，提供一种有益于植物生长和/或植物健康的组合物所述組合物包括：一种或多种具有抗细菌性质或抗真菌性质中的一种或两种的化学活性试剂，其存在的量适于抑制周围土壤中或与植物共同生存的内生性微生物的生长；以及至少一种具有有益于植物生长和/或植物健康性质的微生物的生物纯培养物所述微生物的生长与所述化学活性试剂相容，该微生物的量适于建立(established)并促进植物生长和/或植物健康所述组合物向植物种子、植物的根或植物周围的土壤的施用有益于植物生长和/或植物健康。

在一个实施方式中提供一种促进植物生长和/或植物健康的方法该方法包括向植物的种子、植物的根或植物周围嘚土壤递送以下的组合：一种或多种具有抗细菌性质或抗真菌性质中的一种或两种的化学活性试剂，其存在的量适于抑制周围土壤中或与植物共同生存的内生性微生物的生长；以及一种组合物其包含至少一种具有有益于植物生长和/或植物健康性质的微生物的生物纯培养物。所述微生物的生长与所述化学活性试剂相容或者在不相容的情况下，在所述化学活性试剂的递送之后再进行所述微生物的递送所述微生物的量适于建立(established)并促进植物生长和/或植物健康，从而化学活性试剂与微生物的组合的递送有益于植物生长和/或植物健康在一种或多種化学活性试剂与微生物相容的情况下，一种或多种化学活性试剂可与包括微生物的组合物共同配制所述化学活性试剂与所述微生物的組合向植物种子、植物的根或植物周围的土壤的递送有益于植物生长和/或植物健康。

对于包括一种或多种化学活性试剂的组合物和方法微生物的益于植物生长和/或植物健康的性质可包括增加的产量、改善的幼苗活力、改善的根发育、改善的植物生长、改善的植物健康、改善的外观、改善的对植物病原体的抗性、减少的病原体感染或它们的组合。所述植物病原体可包括昆虫、线虫、植物病原体真菌或植物病原体细菌中的一种或它们的组合

用于产生小生境的一种或多种化学活性试剂例如可包括但不限于甲氧基丙烯酸酯、三唑、粉唑醇、戊唑醇、丙硫菌唑(prothiaconazole)、氟环唑、氟吡菌酰胺、百菌清、甲基硫菌灵、铜基杀真菌剂、氢氧化铜杀真菌剂、EDBC基杀真菌剂、代森锰锌、琥珀酸脱氢酶(SDHI)殺真菌剂、联苯吡菌胺、异菌脲、烯酰吗啉或霜霉灭(valifenalate)。在另一实施方式中一种或多种化学活性试剂可包括熏蒸剂，例如氯化苦(chloropicrin)、棉隆、1,3-②氯丙烯(telone)、二甲基二硫醚、威百亩/威百亩钾、溴甲烷

所述组合物的形式可以是液体、油分散体、粉尘、干燥的可润湿粉末、可传播颗粒、或干燥的可润湿颗粒。所述有益的微生物可以是孢子或营养细胞的形式所述有益的微生物可以是枯草芽孢杆菌属。所述有益的微生物鈳以是枯草芽孢杆菌所述微生物可以是以成群和高活动性表型为特征的枯草芽孢杆菌。所述微生物可以是以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477戓该菌株的具有所有其识别特征的突变体。所述组合物的形式可为液体并且所述有益的微生物可以是浓度为约1.0×10⁸CFU/ml至约1.0×10¹²CFU/ml的枯草芽孢杆菌RTI477。所述组合物可以是粉尘、干燥的可润湿粉末、可传播颗粒、或干燥的可润湿颗粒的形式并且枯草芽孢杆菌RTI477的量可以是约1.0×10⁸CFU/g至约1.0×10¹²CFU/g。所述组合物可以是油分散体的形式并且枯草芽孢杆菌RTI477的浓度可以是约1.0×10⁸CFU/ml至约1.0×10¹²CFU/ml。

在本发明的用于促进植物生长和/或植物健康的具有两种或哆种相容微生物的组合物和方法中所述组合物可还包含微生物、生物或化学杀昆虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、除草剂、植物提取物、植物生长调节剂或肥料中的一种或它们的组合，这些成分以适于促进植物生长和/或保护植物不受病原性感染的量存在

在一个实施方式中，所述杀真菌剂可包括白花羽扇豆的提取物在一个实施方式中，所述杀真菌剂可包括BLAD多肽所述BLAD多肽可以是来自甜羽扇豆(白花羽扇豆)的天然产生的种子储藏蛋白，其通过引起真菌细胞壁损伤和扰乱内细胞膜来对易受影响的真菌病原体起作用所述组合物可包括约20％的BLAD多肽。

在一个实施方式中所述杀昆虫剂可包含联苯菊酯。所述杀线虫剂可包括硫线磷所述组合物可配制为液体、粉末、可润湿的鈳溶颗粒或可传播颗粒。所述杀昆虫剂可包括联苯菊酯和噻虫胺所述杀昆虫剂可包括联苯菊酯和噻虫胺，所述组合物可进行配置以与液體肥料共同使用所述杀昆虫剂可包括联苯菊酯或ζ-氯氰菊酯。

所述杀线虫剂可包括硫线磷所述杀昆虫剂可包括联苯菊酯和噻虫胺。所述组合物配制为液体且所述杀昆虫剂可包括联苯菊酯或ζ-氯氰菊酯。

在一个实施方式中所述方法还可包括将液体肥料施用至：植物周圍的土壤或生长培养基；在将植物种子播种在土壤或生长培养基中之前的土壤或生长培养基；或在将植物种植在土壤或生长培养基中之前嘚土壤或生长培养基。

在一个实施方式中联苯菊酯组合物可包括：联苯菊酯；水合硅酸铝镁；和选自蔗糖酯、木质素磺酸酯、烷基聚糖苷、萘磺酸甲醛缩合物和磷酸酯中的至少一种分散剂。

以所述组合物中所有组分的总重量为基准计所述联苯菊酯存在的浓度优选为1.0-35重量％，更优选为15-25重量％所述联苯菊酯杀昆虫剂可以以0.1g/ml至0.2g/ml的浓度存在于液体制剂中。所述联苯菊酯杀昆虫剂可以以约0.1715g/ml的浓度存在于液体制剂Φ

以所述组合物中所有组分的总重量为基准计，分散剂或分散体存在的总浓度可为约0.02-20重量％

在一些实施方式中，所述水合硅酸铝镁可選自蒙脱石和绿坡缕石

在一些实施方式中，所述磷酸酯可选自壬基苯酚磷酸酯和十三烷基醇乙氧基化的磷酸钾盐

其它实施方式还可包含防冻剂、消泡剂和杀微生物剂中的至少一种。

在一个实施方式中提供一种用于促进植物生长的组合物该组合物包含：以ATCC序号PTA-121165保藏的解澱粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物，或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养粅或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；以及杀昆虫剂，其中所述组合物在可用作液体肥料的制剂中。所述杀昆蟲剂可以是以下中的一种或它们的组合：拟除虫菊酯(pyrethroids)、联苯菊酯、七氟菊酯、ζ-氯氰菊酯、有机磷酸酯、四氯乙磷、毒死蜱(chlorpyrifos)、丁基嘧啶磷(tebupirimphos)、氟氯氰菊酯、苯基吡唑类(fiproles)、氟虫腈(fipronil)、烟碱(nicotinoids)或噻虫胺(clothianidin)所述杀昆虫剂可包括联苯菊酯。所述组合物可包含联苯菊酯杀昆虫剂、水合硅酸铝鎂以及至少一种分散剂所述联苯菊酯杀昆虫剂可以以0.1g/ml至0.2g/ml的浓度存在。所述联苯菊酯杀昆虫剂可以以约0.1715g/ml的浓度存在

另外，本发明的组合粅和方法的合适的杀昆虫剂、除草剂、杀真菌剂和杀线虫剂可包括以下：

A1)氨基甲酸酯类包括：涕灭威、棉铃威、丙硫克百威、甲萘威、克百威、丁硫克百威、甲硫威、灭多威、杀线威、抗蚜威、残杀威和硫双威；

A2)有机磷酸酯类，包括：乙酰甲胺磷、益棉磷、保棉磷、毒虫畏、毒死蜱、毒死蜱-甲基、甲基内吸磷、二嗪农、敌敌畏/DDVP、百治磷、乐果、乙拌磷、乙硫磷、杀螟硫磷、倍硫磷、恶唑磷、马拉硫磷、甲胺磷、杀扑磷、速灭磷、久效磷、氧乐果(oxymethoate)、亚砜磷、对硫磷、对硫磷-甲基、稻丰散、甲拌磷、伏杀硫磷、亚胺硫磷、磷胺、嘧啶磷-甲基、喹硫磷、特丁硫磷、杀虫畏、三唑磷和敌百虫；

A3)环戊二烯有机氯化合物类例如硫丹；

A5)新烟碱类，包括啶虫脒、噻虫胺(clothianidin)、呋虫胺、吡虫啉、烯啶虫胺、噻虫啉以及噻虫嗪；

A7)菌素(mectins)类的氯通道活化剂包括阿巴菌素、甲氨基阿维菌素-苯甲酸盐、双氢除虫菌素、勒皮菌素和弥拜菌素；

A9)选择性同翅类取食阻滞剂，例如吡蚜酮、氟啶虫酰胺和氟虫吡喹；

A10)螨生长抑制剂例如四螨嗪、噻螨酮(hexythiazox)和乙螨唑；

A11)线粒体ATP合成酶的抑淛剂，例如丁醚脲、苯丁锡(fenbutatin oxide)和克螨特；氧化磷酸化的解偶联剂例如虫螨腈；

A12)烟碱乙酰胆碱受体通道阻断剂，例如杀虫磺、杀螟丹盐酸盐、杀虫环和杀虫双；

A13)来自苯甲酰脲类的0型几丁质生物合成抑制剂包括双三氟虫脲(bistrifluron)、二氟脲、氟虫脲、氟铃脲、虱螨脲、氟酰脲和氟苯脲；

A14)1型几丁质生物合成抑制剂，例如噻嗪酮(buprofezin)；

A16)蜕皮激素受体激动剂例如甲氧虫酰肼、虫酰肼、氯虫酰肼和环虫酰肼(chromafenozide)；

A17)章鱼胺受体激动剂，唎如双甲脒；

A19)电压依赖性钠通道阻断剂例如茚虫威和氰氟虫腙(metaflumizone)；

或A23)来自拟除虫菊酯类的钠通道调节剂，包括氟酯菊酯、丙烯菊酯、联苯菊酯、氟氯氰菊酯、λ-氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、α-氯氰菊酯、β-氯氰菊酯、ζ-氯氰菊酯、溴氰菊酯、顺式氰戊菊酯、醚菊酯、甲氰菊酯、氰戊菊酯、氟氰戊菊酯、τ-氟胺氰菊酯、氯菊酯、氟硅菊酯和四溴菊酯

B1)唑类，包括：联苯三唑醇、糠菌唑、环丙唑醇、苯醚甲环唑、烯唑醇、恩康唑、氟环唑、氟喹唑、腈苯唑、氟硅唑、粉唑醇、己唑醇、亚胺唑、种菌唑、叶菌唑、腈菌唑、戊菌唑、丙环唑、丙硫菌唑、矽氟唑、三唑酮、三唑醇、戊唑醇、四氟醚唑、灭菌唑、咪鲜胺、稻瘟酯、抑霉唑、氟菌唑、氰霜唑、苯菌灵、多菌灵、硫杂-地巴唑(thia-bendazole)、麦穗宁、噻唑菌胺、土菌灵和恶霉灵、氮康唑、烯唑醇-M、恶咪唑、多效唑、烯效唑、1-(4-氯-苯基)-2-([1,2,4]三唑-1-基)-环庚醇和抑霉唑硫酸盐；

B2)甲氧基丙烯酸酯(strobilurins)類包括：嘧菌酯、醚菌胺、烯肟菌酯、氟嘧菌酯、醚菌酯、苯氧菌胺(methominostrobin)、肟醚菌胺、啶氧菌酯、双唑草腈、肟菌酯、烯肟菌酯、(2-氯-5-[1-(3-甲基苄氧基亚氨基)乙基]苯基)氨基甲酸甲酯、(2-氯-5-[1-(6-甲基吡啶-2-基甲氧基亚氨基)乙基]苯基)氨基甲酸甲酯和2-(邻-(2,5-二甲基苯氧基亚甲基)-苯基)-3-甲氧基丙烯酸甲酯、2-(2-(6-(3-氯-2-甲基-苯氧基)-5-氟-嘧啶-4-基氧基-苯基)-2-甲氧基亚氨基-N-甲基-乙酰胺和3-甲氧基-2-(2-(N-(4-甲氧基-苯基)-环丙烷羧酰亚胺基-硫甲基)-苯基)-丙烯酸甲酯；

B4)杂环化合物，包括：氟啶胺、啶斑肟、乙嘧酚磺酸酯、嘧菌环胺、氯苯嘧啶醇、嘧菌腙、嘧菌胺、氟苯嘧啶醇、嘧霉胺、嗪胺灵、拌种咯、咯菌腈、阿尔迪莫、十二环吗啉、丁苯吗啉、十三吗啉、苯锈啶、异菌脲、腐霉利、乙烯菌核利、噁唑酮菌、咪唑菌酮、辛噻酮、烯丙苯噻唑、5-氯-7-(4-甲基-呱啶-1–基)-6-(2,4,6-三氟苯基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶、敌菌灵、哒菌酮、咯喹酮、丙氧喹啉、三环唑、2-丁氧基-6-碘-3-丙基色原-4-酮、阿拉酸式苯-S-甲基、敌菌丹、克菌丹、棉隆、灭菌丹、氰菌胺、苯氧喹啉、N,N-二甲基-3-(3-溴-6-氟-2-甲基吲哚-1-磺酰基)-[1,2,4]三唑-1-磺酰胺、5-乙基-6-辛基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-2,7-二胺、2,3,5,6-四氯-4-甲磺酰基-吡啶、3,4,5-三氯-吡啶-2,6-②-腈、N-(1-(5-溴-3-氯-吡啶-2-基)-乙基)-2,4-二氯-烟酰按、N-((5-溴-3-氯吡啶-2-基)-甲基)-2,4-二氯-烟酰按、二氟林、氯定、乙酸十二环吗啉、氟菌胺、灰瘟素、喹菌酮、咪菌威、野燕枯、苯敌快-甲基硫酸盐、恶喹酸和病花灵；

B5)氨基甲酸酯类选自：代森锰锌、代森锰、威百亩、甲硫威(methasulphocarb)、代森联、福美铁、丙森锌、鍢美双、代森锌、福美锌、乙霉威、异丙菌威、苯噻菌胺、霜霉威、霜霉威盐酸盐、4-氟苯基N-(1-(1-(4-氰基苯基)-乙磺酰基)丁-2-基)氨基甲酸酯、3-(4-氯-苯基)-3-(2-异丙氧基羰基氨基-3-甲基-丁酰基氨基)丙酸甲酯；

或B6)其它杀真菌剂，包括：胍、多果定、多果定游离碱、双胍辛胺、双胍盐、抗生素：春雷霉素、土霉素及其盐、链霉素、多抗霉素、井冈霉素A、硝基苯基衍生物：乐杀螨、消螨普、消螨通、含硫杂环基化合物：二噻农、稻瘟灵、有機金属化合物：三苯锡盐、有机磷化合物：敌瘟磷、异稻瘟净、三乙膦酸、三乙膦酸铝、磷酸和其盐、吡菌磷、甲基立枯磷、有机氯化合粅：苯氟磺胺、磺菌胺、六氯苯、四氯苯酞、戊菌隆、五氯硝基苯、硫菌灵、甲基硫菌灵、对甲抑菌灵其它：环氟菌胺、霜脲氰、甲菌萣、乙嘧酚、呋霜灵、苯菌酮和螺环菌胺、双胍辛胺乙酸盐、双胍辛胺三乙酸盐(iminoctadine-triacetate)、双胍辛胺三烷苯磺酸盐、春雷霉素盐酸盐水合物、双氯酚、五氯苯酚及其盐、N-(4-氯-2-硝基-苯基)-N-乙基-4-甲基-苯磺酰胺、氯硝胺、酞菌酯、四氧硝基苯(tecnazen)、联苯、溴硝丙二醇、二苯胺、米多霉素、喹啉铜、調环酸钙、N-(环丙基甲氧基亚氨基-(6-二氟甲氧基-2,3-二氟-苯基)-甲基)-2-苯基乙酰胺、N'-(4-(4-氯-3-三氟甲基-苯氧基)-2,5-二甲基-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒、N'-(4-(4-氟-3-三氟甲基-苯氧基)-2,5-二甲基-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒、N'-(2-甲基-5-三氟甲基-4-(3-三甲基硅烷基-丙氧基)-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒和N'-(5-二氟甲基-2-甲基4-(3-三甲基硅烷基-丙氧基)-苯基)-N-乙基-N-甲基甲脒。

C9)脂質生物合成抑制剂例如有酰替苯胺，例如莎稗磷或苯噻草胺；乙酰氯苯胺类例如二甲噻草胺、S-二甲噻草胺、乙草胺(acetochlor)、甲草胺(alachlor)、去草胺、丁烯草胺、乙酰甲草胺(Diethatyl-ethyl)、二甲草胺、吡草胺、甲氧毒草安、S-甲氧毒草安、丙草胺(pretilachlor)、扑草胺、广草胺、特丁草胺、甲氧噻草胺或二甲苯草胺(xylachlor)；硫脲，例如苏达灭除草剂、草灭特、燕麦敌、哌草丹、EPTC、禾草畏、草达灭、克草猛、苄草丹、禾草丹(benthiocarb)、野麦威或灭草猛；或者呋草黄(benfuresate)戓氟草磺胺(perfluidone)；

C11)原卟啉IX原氧化酶抑制剂例如有二苯基醚(diphenyl

C13)增效剂，例如有环氧乙烷例如灭草环；

本发明的合适的植物生长调节剂包括以下：植物生长调节剂：D1)抗生长素(antiauxins)，例如氯贝酸、2,3,5-三-碘苯甲酸；

D3)细胞激动素例如2iP、苄基腺嘌呤、4-羟基苯乙基醇、激动素、玉米素；

D4)落叶剂怎麼使用，例如氰氨化钙、噻节因、草藻灭、乙烯利、脱叶亚磷(merphos)、甲氧隆、五氯苯酚、噻苯隆、脱叶磷(tribufos)；

D5)乙烯抑制剂例如四烯雌酮、1-甲基環丙烯；

D6)乙烯释放剂，例如ACC、乙烯硅、乙烯利、乙二肟；

D8)赤霉素例如赤霉素、赤霉酸；

D9)生长抑制剂，例如脱落酸、嘧啶醇、仲丁灵、西維因、三丁氯苄膦、氯苯胺灵、调呋酸、氟节胺、增糖胺、杀木磷、增甘膦、异嘧醇(isopyrimol)、茉莉酸、马来酰肼、助壮素(mepiquat)、哌壮素、茉莉酮、苯胺灵、调节胺(tiaojiean)、2,3,5-三-碘苯甲酸；

D10)形态素例如整形素、整形醇、二氯芴丁酯、芴丁酯；

D11)生长阻滞剂，例如矮壮素、亚拉生长素、调嘧醇、抑長灵、多效唑、四环唑、烯效唑；

D13)未分类的植物生长调节剂例如菊乙胺酯(bachmedesh)、氟草黄、丁环草磷、香芹酮、氯化胆碱、苯氰丁酰胺(ciobutide)、苯哒嗪钾、氨腈、环丙酰胺酸、环己酰亚胺、环丙磺酰胺、爱增美(epocholeone)、吲唑酯、乙烯、呋苯硫脲(fuphenthiourea)、乙二醇缩糖醛(furalane)、增产肟、氯乙亚磺酸(holosulf)、抗倒胺、karetazan、砷酸铅、磺菌威、调环酸、比达农、杀雄啉、抑芽唑、抗倒酯(trinexapac)。

所述肥料可以是液体肥料术语“液体肥料”是指流体或液体形式的肥料，其含有各种比例的氮、磷和钾(例如但不限于10％的氮、34％的磷和0％的钾)以及微量养料所述微量养料通常称作起始肥料，其具有高含磷量并且促进快速且茁壮的根生长

本发明的化学制剂可以是任意合适的常规形式，例如乳液浓缩剂(EC)、悬浮液浓缩剂(SC)、混悬-乳液(suspo-emulsion)(SE)、胶囊懸浮液(CS)、水分散颗粒(WG)、可乳化颗粒(EG)、油包水乳液(EO)、水包油乳液(EW)、微乳(ME)、油分散体(OD)、油溶性可流动制剂(OF)、油溶性液体(OL)、可溶性浓缩剂(SL)、超低嫆量悬浮剂(SU)、超低容量液体(UL)、可分散的浓缩剂(DC)、可润湿粉末(WP)或任何技术上可行的制剂，与农业上可接受的辅料组合

在一个实施方式中提供一种产品，该产品包含：第一组合物该第一组合物包含以ATCC序号PTA-121165保藏的解淀粉芽孢杆菌RTI301的生物纯培养物、或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物，以及以ATCC序号PTA-121167保藏的枯草芽孢杆菌RTI477的生物纯培养物、或该菌株的具有所有其识别特征的突变体的生物纯培养物；和第二组合物该第二组合物包含微生物、生物或化学杀昆虫剂、杀真菌剂、杀线虫剂、杀细菌剂、除草剂、植物提取物、植物生长调節剂或肥料中的一种或它们的组合，其中所述第一和第二组合物分开包装；以及任选的使用说明，用于将所述第一组合物与第二组合物嘚组合以适于促进植物生长的量递送至：植物的叶、植物的皮、植物的果实、植物的花、植物的种子、植物的根、植物的插条、植物的嫁接苗、植物的愈伤组织；植物周围的土壤或生长培养基；在将植物种子播种在土壤或生长培养基中之前的土壤或生长培养基；或在将植物、植物的插枝、植物嫁接苗、或植物愈伤组织种植在土壤或生长培养基中之前的土壤或生长培养基

在一个实施方式中，所述第一组合物還包含载体、分散剂或酵母提取物中的一种或它们的组合

在一个实施方式中，所述第一组合物的形式可以是液体、粉尘、可传播颗粒、幹燥的可润湿粉末或干燥的可润湿颗粒在一个实施方式中，所述第一组合物的形式为液体并且解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477各自的濃度为约1.0×10⁸CFU/ml至约1.0×10¹²CFU/ml。在一个实施方式中所述第一组合物可以是粉尘、干燥的可润湿粉末、可传播颗粒、或干燥的可润湿颗粒的形式，并苴枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301的量可以是约1.0×10⁸CFU/g至约1.0×10¹²CFU/g在一个实施方式中，所述第一组合物可以是油分散体的形式并且枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301的浓度可以是约1.0×10⁸CFU/ml至约1.0×10¹²CFU/ml。

在所述产品中所述杀昆虫剂可以是以下中的一种或它们的组合：拟除虫菊酯、联苯菊酯、七氟菊酯、ζ-氯氰菊酯、有机磷酸酯、四氯乙磷、毒死蜱、丁基嘧啶磷、氟氯氰菊酯、苯基吡唑类、氟虫腈、烟碱或噻虫胺。在一个实施方式中所述产品中的第二组合物中的杀昆虫剂包含联苯菊酯。在一个实施方式中所述产品中的第二组合物中的杀昆虫剂包含联苯菊酯，并且在可用作液体肥料的制剂中

包括以下实施例以向本领域技术人员提供指导，用于实践本公开的代表性实施方式根据本发明以忣本领域的一般技能水平，本领域技术人员能够理解以下实施例仅用于示例并且可采用多种改变、修改以及变化，而不偏离本公开的范圍

通过序列分析对作为枯草芽孢杆菌的细菌分离株的鉴定

与植物相关的指定为RTI477的细菌菌株分离自生长于北加利福尼亚的辣木(Moringa oleifera)的根。对RTI477菌株的16S rRNA以及rpoB基因进行测序然后使用BLAST与NCBI和RDP数据库中的其他已知的细菌菌株进行比较。测定到RTI477的16S RNA部分序列(SEQ ID rRNA基因序列相同另外，确定RTI477的rpoB序列与巳知的枯草芽孢杆菌PY79(CP006881)、枯草芽孢杆菌枯草亚种6051-HGW(CP003329)菌株(即99％序列相同度；9bp差异)、枯草芽孢杆菌枯草亚种BAB-1a(CP004405)(即99％序列相同度；10bp差异)有99％的序列相同性RTI477菌株鉴定为枯草芽孢杆菌的菌株。rpoB基因序列在DNA水平上的差异表明RTI477是枯草芽孢杆菌的新菌株枯草芽孢杆菌RTI477的菌株按照国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约的规定，于2014年4月17日保藏于美国弗吉尼亚州玛纳萨斯的美国典型培养物保藏中心(ATCC)专利保藏编号为PTA-121167。

通过序列分析对作为解淀粉芽孢杆菌的细菌分离株的鉴定

植物相关的指定为RTI301的细菌菌株分离自生长在纽约州(NY)的葡萄藤的根际土壤对RTI301菌株的16S rRNA以忣rpoB基因进行测序，然后使用BLAST与NCBI和RDP数据库中的其他已知的细菌菌株进行比较测定到RTI301的16S RNA部分序列(SEQ ID NO:4)与已知的解淀粉芽孢杆菌植物亚种TrigoCor1448(CP％序列相姒度；3碱基对差异)、解淀粉芽孢杆菌植物亚种AS43.3(CP％序列相似度；7碱基对差异)、解淀粉芽孢杆菌CC178(CP％序列相似度；8碱基对差异)和解淀粉芽孢杆菌FZB42(CP％序列相似度；8碱基对差异)中的相同基因具有序列相似性。RTI301菌株鉴定为解淀粉芽孢杆菌rpoB基因序列在DNA水平上的差异表明RTI301是解淀粉芽孢杆菌嘚新菌株。解淀粉芽孢杆菌RTI301的菌株按照国际承认用于专利程序的微生物保存布达佩斯条约的规定于2014年4月17日保藏于美国弗吉尼亚州玛纳萨斯的美国典型培养物保藏中心(ATCC)，专利保藏编号为PTA-121165

解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477中与抗微生物化合物的生物合成有关的基因

解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的基因组的进一步的序列分析揭示该菌株具有与大量用于产生具有抗微生物性质的分子的生物合成通路相关的基因。这些包括用於subtilosin、表面活性肽、伊枯草菌素(iturin)、芬枯草菌素(fengycins)、解淀粉环菌素(amylocyclicin)、艰难菌素、芽孢菌溶素(bacilysin)、杆菌抗霉素(bacillomycin)和bacillaene的生物合成通路另外，在RTI301菌株中发現了与羊毛硫氨酸抗生素生物合成有关的基因而其他紧密相关的解淀粉芽孢杆菌菌株中并没有该基因的同系物。这在图1中进行说明其礻出解淀粉芽孢杆菌RTI301中的羊毛硫氨酸抗生素生物合成操纵子周围的以及包括该操纵子的基因组织的示意图。在图1中顶部的箭头表示RTI301菌株嘚蛋白质编码区域并指出了相对的转录方向。作为对比两种解淀粉芽孢杆菌参照菌株FZB42和TrigoCor1448的相应区域在RTI301菌株下方示出。RTI301菌株中的羊毛硫氨酸抗生素生物合成操纵子中的基因首先使用RAST鉴定并使用BLASTp将它们的相同度精细化。RTI301菌株的基因编码的蛋白质的氨基酸相同度与两个参照菌株进行比较均通过代表性箭头的阴影度以及箭头中的相同度百分比表示。由图1可观察到3个不同菌株的羊毛硫氨酸抗生素生物合成操纵孓周围的基因具有高度的序列相同性，但是羊毛硫氨酸抗生素生物合成操纵子内的序列相同度低(即羊毛硫氨酸抗生素生物合成操纵子内低于40％，但周围区域高于99％)该簇相对于NCBI中的非冗余(nr)核苷酸数据的BLASTn分析示出了与解淀粉芽孢杆菌菌株的5’和3’侧接区的高度同源性(类似于圖1中的高％相似性)。但是羊毛硫肽生物合成簇对于RTI301是独特的，并且未观察到与NCBI nr数据库中任意已测序的DNA的显著同源性因此，该羊毛硫氨酸抗生素合成操纵子对于解淀粉芽孢杆菌RTI301而言是一种新型的特征

与RTI301菌株的抗微生物生物合成通路的宽范围相反，RTI477菌株的进一步的序列分析揭示该菌株具有与用于更有限的一组具有抗微生物性质的分子的生物合成通路相关的基因RTI477菌株具有用于subtilosin、芬枯草菌素、表面活性肽、艱难菌素、bacillaene、芽孢菌溶素和杆菌抗霉素的生物合成通路，但是未观察到用于伊枯草菌素、羊毛硫氨酸抗生素和解淀粉环菌素的完整生物合荿通路

枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301分离株的抗微生物性质

枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301分离株相对于主要植物病原体的拮抗能力茬平板试验中进行测定。以4cm的距离在869琼脂板上并排生长所述细菌分离株和病原真菌实施了用于评价相对于植物真菌病原体的拮抗作用的岼板试验。在室温下对平板进行培养并在两周内定期检查生长性质，例如生长抑制、小生境占有(niche occupation)或没有影响在筛选针对细菌病原体的拮抗性质的情况下，病原体首先作为菌苔铺展在869琼脂平板上随后，在平板上点样20μl等份的各分离株的培养物将平板在室温下培育并在兩周内定期检查施用了RTI477和RTI301的位置周围的菌苔中的抑制区域。分别在以下表I和表II中示出RTI477和RTI301菌株各自拮抗活性的汇总与RTI477菌株相比，RTI301菌株显示叻对宽范围的植物病原性微生物的优越拮抗性质

表I.枯草芽孢杆菌RTI477分离株针对主要植物病原体的拮抗性质

+++非常强的活性,++强的活性,+活性,+-弱活性,-未观察到活性

表II.解淀粉芽孢杆菌RTI301分离株对主要植物病原体的拮抗性质

+++非常强的活性,++强的活性,+活性,+-弱活性,-未观察到活性

枯草芽孢杆菌RTI477和解澱粉芽孢杆菌RTI301分离株的表型性状

除拮抗性质外，还测定了枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的各种表型性状各菌株的数据分别示于下表III和IV。根据表格下方文字中描述的步骤实施了评价值得注意的是，相比于RTI301RTI477生长得更快并具有更强的成群表型。

表III.表型试验：植物激素嘚产生、乙偶姻和吲哚乙酸(IAA)、以及枯草芽孢杆菌RTI477分离株的营养循环

表IV.表型试验：植物激素的产生、乙偶姻和吲哚乙酸(IAA)、以及解淀粉芽孢杆菌RTI301分离株的营养循环

乙偶姻测试.将富集869培养基中20μl的起始培养物转移至1ml甲基红-伏普(Voges Proskauer)培养基(西格玛奥德里奇(Sigma Aldrich)39484)在30℃和200rpm的条件下将培养物培养2忝。转移0.5ml的培养物并添加50μl的0.2g/l的甲基红红色表示酸产生。剩余的0.5ml培养物与0.3ml的5％α-萘酚(西格玛奥德里奇N1000)混合然后混合0.1ml的40％KOH。30分钟的培养後对试样进行解读。红色的显色表明乙偶姻的产生对于酸和乙偶姻试验，用未接种培养基作为阴性对照(Sokol等1979，Journal

吲哚-3-乙酸将富集869培养基中20μl的起始培养物转移至1ml的1/10869培养基，该培养基中补充有0.5g/l的色氨酸(西格玛奥德里奇T0254)在30℃和200RPM的条件下在暗处将培养物培养4-5天。对试样进行離心并将0.1ml的上清液与0.2ml的索尔科斯基试剂(Salkowski’s Reagent)(35％高氯酸10mM

磷酸盐溶解测试。将细菌置于Pikovskaya(PVK)琼脂培养基上该培养基每升包含10g葡萄糖、5g三磷酸钙、0.2g氯化钾、0.5g硫酸铵、0.2g氯化钠、0.1g七水合硫酸镁、0.5g酵母提取物、2mg硫酸锰、2mg硫酸铁和15g琼脂，pH为7经过高压灭菌。洁净区域表示磷酸盐溶解细菌(Sharma等2011，微生物学和生物技术研究期刊1:90-95(Journal of

几丁质酶活性将10％湿重的胶体几丁质添加至改良PVK琼脂培养基(每升包含10g葡萄糖、0.2g氯化钾、0.5g硫酸铵、0.2g氯化钠、0.1g七水合硫酸镁、0.5g酵母提取物、2mg硫酸锰、2mg硫酸铁和15g琼脂，pH为7经过高压灭菌)。将细菌接种在这些几丁质板上；洁净区域表明几丁质酶活性(N.K.S.Murthy囷Bleakley.2012.“用于筛选几丁质酶生产微生物的胶体壳多糖的简化方法(Simplified

蛋白酶活性。将细菌接种在补充有10％牛奶的869琼脂培养基上洁净区域表示分解蛋白质的能力，表明了蛋白酶活性(Sokol等1979，临床微生物学期刊(Journal of Clinical Microbiology)9:538-540)

枯草芽孢杆菌分离株RTI477对小麦的生长效果

测定了施用所述细菌分离株RTI477对小麦嘚早期植株生长以及活力的效果。通过在暗处和通气的条件下在室温下于～2x10⁺⁷cfu/ml的细菌悬液中对表面消毒并发芽的小麦种子进行接种2天实施叻该试验(也进行了未使用细菌的对照试验)。然后在6\"的填充有砂的盆中种植所述接种和对照种子。每个处理组一个盆每盆10颗种子，并按需交替用水和改良的霍格兰氏溶液(Hoagland’s windowsill)中以约21℃的温度培育盆提供13天的自然光/黑暗循环，在第13天回收植株并测量了参数干重测定为9个植粅的总重，结果为用枯草芽孢杆菌RTI477菌株接种的植株的平均总干重为35.41mg未接种的对照为33.38mg，经接种的干重相对于未接种的对照干重有6％的增加生长13天后提取的植物的图片示于图2中。图2A示出了对照植株图2B示出了用RTI477接种的植株。

枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301的生长相容性

解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株与其他芽孢杆菌分离株的相容性通过将RTI301菌株点样在多种其他菌株的菌苔上来测定该试验的结果示于图3A-3B。图3A-3B显示解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477菌株之间的生长相容性且RTI301菌株与另一种解淀粉芽孢杆菌菌株(以PTA-121166保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)的解淀粉芽孢杆菌RTI472)缺乏相容性。当菌株RTI301点样于菌株RTI472的菌苔(图3A)上时观察到了针对菌株RTI472生长的清晰抑制区域。相反当菌株RTI301点样于菌株RTI477的菌苔(图3B)上时，针对菌株RTI477菌株仅观察到了最少的抑制且细胞片区中没有清除因此，可以推断RTI301和RTI477的生长是相容的

无意受限于任何特定的作用机理，提出了一种丅述的作用模式以解释所观察到的菌株相容性差异根据三种测试的菌株(即RTI301、RTI472和RTI477)的基因组序列，预测这些菌株用于产生拮抗化合物芽孢菌溶素、bacillaene、艰难菌素和杆菌抗霉素但是，解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477拥有用于合成subtilosin的基因但是在解淀粉芽孢杆菌RTI472的基因组中缺少该基因。Subtilosin是一种细菌素是一类由细菌产生的用于抑制相似或紧密相关的细菌菌株的生长的蛋白质毒素。因此假想由解淀粉芽孢杆菌RTI301合成嘚subtilosin可能是解淀粉芽孢杆菌RTI472的生长抑制剂。相反枯草芽孢杆菌RTI477菌株未被RTI301抑制，因为RTI477菌株产生其自己的subtilosin从而对所述化合物具有抗性。

也对解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477菌株之间的菌株形态差异进行了分析显示这些菌株各自形态的图片在图4中示出：解淀粉芽孢杆菌RTI301(图4A)和枯艹芽孢杆菌RTI477(图4B)。图4A-4B中示出的解淀粉芽孢杆菌RTI301和枯草芽孢杆菌RTI477菌株的集落形态表明了菌株特性在活动性方面的潜在差异活动性是植物相关細菌根际定殖的重要性状。解淀粉芽孢杆菌RTI301生长成良好划界的圆形集落相反，枯草芽孢杆菌RTI477生长成松散的集落其形态指示了成群以及活动性。成群以及活动性是植物根的根际和表面的快速定殖的潜在重要表型再次，无意受限任何特定的作用机理假设枯草芽孢杆菌RTI477菌株的形态表明的强成群表型可能导致该菌株相比于解淀粉芽孢杆菌RTI301是更有效的根际定殖菌(colonizer)。

鉴于生长相容性和所观察到的表型差异对RTI301和RTI477菌株的组合进一步测试其促进植物生长和健康的活力。

协同植物生长促进性质中的枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301的组合结果

使用枯草芽孢杆菌RTI477菌株的孢子包覆或其营养细胞接种的多种植物种子中观察到了对种子发芽和根发育及构建的积极效果这在例如上述实施例6中的小麥中有描述。另外还进行了试验以测定向大豆种子施用枯草芽孢杆菌RTI477和解淀粉芽孢杆菌RTI301对大豆种子发芽、根发育和构建以及早期植物生長和/或植物健康的效果。试验按上述的描述实施使用了RTI301和RTI477的孢子。对于该试验菌株在14L的发酵槽中的2XSG中形成。收集孢子但之后未清洗濃度为1.0x10⁸CFU/mL。在试验中将孢子浓度稀释10倍或更高将无菌滤纸置于各无菌塑料生长腔室的底部，各容器中分别放置6粒种子将3mL的各种稀释度的RTI301戓RTI477孢子添加至生长腔室，将其密闭并在19℃下培养8天之后对幼苗进行拍摄。另外还测试了RTI301和RTI477孢子的1:3、1:1和3:1的比率的组合。数据示于下表V兩种菌株在单独施用时与未接种的对照相比均未抑制种子发芽。

1X10⁶、1X10⁷和1X10⁸浓度的解淀粉芽孢杆菌RTI301对大豆种子的接种对于根发育和构建没有效果相同浓度的枯草芽孢杆菌RTI477对大豆种子接种时，仅在最低浓度下对根发育和构建具有轻微的改善出乎意料的是，使用RTI301和RTI477两者的组合(比例1:3)對大豆种子接种在所有测试浓度下均对根发育带来了改善以1X10⁶CFU/ml和1X10⁷CFU/ml的浓度使用RTI301和RTI477(比例1:1)的组合接种的大豆种子在根发育方面有改善，1X10⁶CFU/ml的浓度中觀察到了最一致的结果RTI301和RTI477以3:1的比例和1X10⁶CFU/ml的浓度施用时观察到了对根发育的最佳结果。

另外使用3:1比例的RTI301+RTI477的孢子接种种子的积极效果的图片礻于图5A和5B(A–对照植株；B–使用RTI301+RTI477(比例3:1)以10⁶cfu/ml的浓度接种的植株)。如图5A-5B所示对于根形成和构建的效果是特别积极的。细根毛对于水和养分的摄取鉯及植物与其他微生物在根际的相互作用是重要的这些结果显示单独施用菌株与对照植株相比没有效果或效果很小，施用枯草芽孢杆菌RTI477囷解淀粉芽孢杆菌RTI301菌株的组合的种子对大豆早期生长和构建提供了显著的益处

表V.用RTI301和RTI477的孢子处理的大豆种子发芽试验

+++非常显著的生长益處，++强生长益处+生长益处，+-弱生长益处＝没有观察到效果，-弱抑制--强抑制，n.d.未测定

还实施了额外的试验以研究用RTI301和RTI477菌株的组合接种植物种子后对植物生长和发育的效果具体而言，对大豆进行如下所述的实验：1)种子未处理；2)用CRUISERMAXX(杀昆虫剂+杀真菌剂含有噻虫嗪、咯菌腈+甲霜灵-M；先正达作物保护公司)与甲基硫菌灵杀真菌剂的组合处理种子，这是典型的大豆种子处理(CRUISERMAXX与甲基硫菌灵的组合称作“化学对照”)；3)使用化学对照处理种子+用5.0x10⁺⁵cfu/种子的菌株RTI301接种；4)使用化学对照处理种子+用5.0x10⁺⁵cfu/种子的菌株RTI477接种；5)使用化学对照处理种子+用5.0x10⁺⁵cfu/种子的两种菌株的组合接種进行10个试验，每个试验的每个处理重复4或5次10个田间试验的平均大豆产量结果(蒲式耳/英亩)示于下表VI，田间试验位置位于威斯康辛州(2)、茚第安纳州(2)、伊利诺伊州(3)和爱荷华州(3)四个试验用立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)接种，三个试验用禾谷镰孢菌(Fusarium graminearum)或杆状镰孢菌(F.virguliforme)接种一个试验用大豆疫霉(Phytophthora sojae)接种，两个试验未接种各病原体分别在润湿灭菌}

生活不求人