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人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答：
(1)制备单克隆抗体过程中要用到_________和__________技术。(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于________，使小鼠产生分泌相应________的淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的______________免疫。(3)在细胞内DNA合成一般有两条途径，主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基喋呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。①．利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的_________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。②．最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是___________________。(4)此过程生产的单克隆抗体可以与______________特异性结合，从而诊断早孕。
题型：读图填空题难度：中档来源：北京期末题
(1)动物细胞培养&& &动物细胞融合(2)抗原&&& 抗体& & 体液(3)①．氨基喋呤&& &②．能无限增殖并分泌特异性抗体(4)人绒毛膜促性腺激素(或HCG)
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据魔方格专家权威分析，试题“人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖..”主要考查你对&&单克隆抗体，免疫调节的类型&&等考点的理解。关于这些考点的“档案”如下：
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单克隆抗体免疫调节的类型
单克隆抗体：1、抗体：一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体。从血清中分离出的抗体产量低、纯度低、特异性差。2、单克隆抗体的制备（1）制备产生特异性抗体的B淋巴细胞：向免疫小鼠体内注射特定的抗原，然后从小鼠脾内获得相应的B淋巴细胞 （2）获得杂交瘤细胞①将鼠的骨髓瘤细胞与脾细胞中形成的B淋巴细胞融合；②用特定的选择培养基筛选出杂交瘤细胞，该杂种细胞既能够增殖又能产生抗体。（3）克隆化培养和抗体检测（4）将杂交瘤细胞在体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖（5）提取单克隆抗体：从细胞培养液或小鼠的腹水中提取 3、单克隆抗体的应用(1)作为诊断试剂，具有准确、高效、简易、快速的优点。(2)用于治疗疾病和运载药物。 血清抗体与单克隆抗体的比较：
知识点拨：1、融合的结果是有很多不符合要求的；如有2个B淋巴细胞融合的细胞等，所以要进行筛选。2、筛选出能够分泌所需抗体的杂种细胞。3、杂交瘤细胞的特点：既能大量繁殖，又能产生专一的抗体。4、单克隆抗体的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。5、单克隆抗体的作用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质的细微差异，并跟一定抗原发生特异性结合，具有准确、高效、简易、快速的优点。用于治疗疾病和运载药物：主要用于治疗癌症治疗，可制成“生物导弹”，也有少量用于治疗其它疾病。知识拓展：制备单克隆抗体过程中的筛选：筛选是将未融合的B淋巴细胞、骨髓瘤细胞以及BB融合、瘤瘤融合的细胞通过选择培养基淘汰，筛选出B瘤融合的细胞。筛选是将产生特定抗体的B瘤细胞通过细胞培养用相应抗原检测的办法筛选出来。因为从体内取免疫过的B淋巴细胞时取出很多种，形成的杂交瘤细胞有很多种，所以需筛选出产生特定抗体的杂交瘤细胞。 免疫调节的类型:免疫调节的类型：包括非特异性免疫和特异性免疫1、非特异性免疫：包括由皮肤、黏膜构成人体的人体免疫第一道防线和体液中的杀菌物质和吞噬细胞构成的第二道防线。人生来就有，不是针对某一类特定的病原体。2、特异性免疫（第三道防线） (1)组成：主要由免疫器官和免疫细胞借助血液循环和淋巴循环而组成。(2)作用：抵抗外来病原体和抑制肿瘤等。 (3)方式：体液免疫和细胞免疫。(4)过程 ①体液免疫： ②细胞免疫（4）主动免疫：利用抗原刺激，使机体产生抗体的方法，而非直接自体外引入抗体。主动免疫对随后的感染有高度抵抗的能力。可通过疾病病原体本身或通过免疫接种(使用已杀死的或弱化的疫苗或类毒素)产生。免疫须经几天，几个星期或更长时间才出现，但能长久甚至终生保持，且通过注射所需抗原很容易再活化。（5）被动免疫：机体通过获得外源性免疫效应分子（如抗体等）或免疫效应细胞而获得的相应免疫力。主动免疫和被动免疫的区别：主动免疫接种的是灭活或减毒的抗原，而被动免疫接种的事抗体。&知识点拨：体液免疫与细胞免疫的判断方法：1、据免疫的结果：如果免疫引起靶细胞裂解并释放其中隐藏的抗原，则为细胞免疫；如果两种成分结合形成沉淀或细胞集团，则为体液免疫。2、根据抗原的种类：如果抗原只进入体液，则为体液免疫；如果抗原进入组织细胞，则为细胞免疫。
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8868510809683749802019332298726人绒毛膜促性腺激素的游离β亚单位对滋养细胞疾病的诊断价值的研究--《山西医科大学》2002年硕士论文
人绒毛膜促性腺激素的游离β亚单位对滋养细胞疾病的诊断价值的研究
【摘要】：
目的 探讨人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位(F-β-HCG)及F-β-HCG／HCG百分比在滋养细胞疾病诊断中的价值。
方法 应用化学发光免疫测定法测定15例葡萄胎患者清宫前，20例侵蚀性葡萄胎患者及17例绒癌患者未治疗前血清HCG、β-HCG及F-β-HCG浓度，计算F-β-HCG／HCG、F-β-HCG／β-HCG的百分比，并且在治疗期间动态监测其变化。选择同期正常早孕患者40例作为对照组。
结果 F-β-HCG在正常早孕妇女、葡萄胎患者、侵蚀性葡萄胎及绒癌患者的血清平均值分别为24±11ng／ml、715+397ng／ml、69±11ng／ml、245+229ng／ml。F-β-HCG／HCG及F-β-HCG／β-HCG的百分比在恶性滋养细胞肿瘤患者显著高于葡萄胎及正常早孕妇女(P＜0.001)。该比值在绒癌患者又高于侵蚀性葡萄胎患者。
结论 F-β-HCG可作为妊娠后判断是正常妊娠，还是滋养细胞疾病的一项监测指标；F-β-HCG／HCG，F-β-HCG／β-HCG的百分比可反应滋养细胞疾病的恶性程度。
【关键词】：
【学位授予单位】：山西医科大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2002【分类号】：R711.7【目录】：
英文缩略词3-4
ABSTRACT5-6
第一部分 对法国Magia120L全自动化学发光免疫分析仪的初步评价7-13
材料和方法7-8
结果和讨论8-12
参考文献12-13
第二部分 探讨人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位对滋养细胞疾病的诊断价值13-20
材料和方法13-15
参考文献19-20
第三部分 综述 人绒毛膜促性腺激素及其临床意义20-31
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【参考文献】
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京公网安备74号人绒毛膜促性腺激素(HCG)是女性怀孕后胎盘滋养层细胞分泌的一种糖蛋白，制备抗HCG单克隆抗体可用于早孕的诊断。下图是抗HCG单克隆抗体制备流程示意图，请分析回答：
(1)制备单克隆抗体过程中要用到_________和__________技术。(2)制备单克隆抗体过程中，给小鼠注射的HCG相当于________，使小鼠产生分泌相应________的淋巴细胞，此过程属于特异性免疫中的______________免疫。(3)在细胞内DNA合成一般有两条途径，主途径是在细胞内由糖和氨基酸合成核苷酸，进而合成DNA，而氨基喋呤可以阻断此途径。另一辅助途径是在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在的情况下，经酶催化作用合成DNA，而骨髓瘤细胞的DNA合成没有此辅助途径。①．利用DNA合成途径不同的特点配制的HAT培养基含有多种成分，其中添加的_________成分具有筛选杂交瘤细胞的作用。②．最终筛选获得的杂交瘤细胞的特点是___________________。(4)此过程生产的单克隆抗体可以与______________特异性结合，从而诊断早孕。
(1)动物细胞培养
动物细胞融合(2)抗原
体液(3)①．氨基喋呤
②．能无限增殖并分泌特异性抗体(4)人绒毛膜促性腺激素(或HCG)
如图所示是一束平行于主光轴并射向凹透镜的入射光线，请画出穿过凹透镜后的折射光线．
（6分）（一）按照题目要求作图：（1）如甲图所示，a、b分别为一束入射光线和一束出射光线。请画出a经过凹透镜后的折射光线和与b对应的入射光线。（2）在乙图中，标出电源的正极，并用箭头表示磁感线方向。（3）请将图丁中所示元件，连接成符合安全用电要求的家庭电路。
如图是一束射向凹透镜且平行于主光轴的入射光线，请画出它通过透镜后的折射光线
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怀孕后人绒毛膜促性激素值是多少为好
怀孕15天后人绒毛膜促性激素值为76.5好吗？谢谢大家
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妊娠不同时期以及各孕妇之间血清HCG绝对值变化很大， 既人同人是不相同的，没有可比性，只可自身比较。
??一般非孕妇女：血HCG&100IU/L
??在妊娠最初3个月，HCG水平每2.2±0.5天约升高一倍。
??正常妊娠期间血清HCG水平：
妊娠周数 HCG（IU/L）
0.2-1周 5-50
1-2周 50-500
2-3周 100-5000
3-4周 500-10000
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你好：从你的检查结果，血HCG值为76.5，考虑为正常，建议严密观察胎儿情况，定期检查。 y
这个值单看一次是看不出任何好坏的，要隔天抽血看有没有翻倍增长，如果有，那就是正常
你很正常的,不要担心,好好保胎,营养你的宝宝吧.
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出门在外也不愁CHO细胞表达重组人绒毛膜促性腺激素性腺激素的调控机理研究--《华东理工大学》2015年硕士论文
CHO细胞表达重组人绒毛膜促性腺激素性腺激素的调控机理研究
【摘要】：人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin, hCG)是由胎盘滋养细胞合成和分泌的一种双亚基糖蛋白激素,在治疗女性不孕、诱导排卵以及某些疾病的检测中起到重要的作用。传统hCG的生产方法是从孕妇尿中提取,但这种方法存在许多缺点,比如来源不受控制,纯化困难,批次间差异较大等,限制了hCG的临床使用。目前已有商品化的重组hCG (rhCG)上市,但由于对蛋白表达的调控机理缺乏了解,蛋白表达水平偏低。本文通过FLP-In定点整合系统筛选出了不同rhCG表达水平的稳定细胞株,并通过对不同表达水平细胞株的转录水平、翻译水平、组装折叠水平以及分泌水平的研究,揭示了rhCG蛋白表达的限制因素。
通过考察不同表达水平细胞株的mRNA丰度以及mRNA的稳定性和转录速率,以及通过ELISA检测方法检测不同表达水平细胞株的胞内胞外α亚基多肽、β亚基多肽以及完整hCG蛋白浓度,本文揭示了rhCG蛋白表达过程的各种限制因素：第一,不同表达水平细胞株β亚基的mRNA水平相对较高,这可能是rhCG蛋白表达所必需的,过量的β亚基合成可能能够促进rhCG的合成。进一步通过验证mRNA的稳定性和转录速率,证实了转录水平的差异并不是由于各亚基mRNA的稳定性差异引起的而是由于转录速率的差异引起的；第二,相比于β亚基的mRNA丰度,高表达细胞株中α亚基的转录水平存在明显限制；第三,在高表达细胞株中,无论是α亚基还是β亚基其从mRNA到多肽的合成步骤均存在明显限制,β亚基的限制尤其显著。这可能与β亚基的结构复杂性有关,β亚基比α亚基多一个链内二硫键和四个O糖链,细胞O糖链修饰能力的缺乏可能是导致这种限制发生的主要原因；第四,在本研究的rhCG蛋白表达水平下,蛋白在组装和分泌水平均不存在明显限制。
本文提出了一种双亚基蛋白表达调控机理研究的方法,揭示了rhCG蛋白表达过程的限制因素,对于构建高表达的rhCG工程细胞株具有重要的指导意义。
【关键词】：
【学位授予单位】：华东理工大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2015【分类号】：R329.2【目录】：
摘要5-6Abstract6-10第1章 文献综述10-23 1.1 人绒毛膜促性腺激素10-12
1.1.1 人绒毛膜促性腺激素的简介10-11
1.1.2 人绒毛膜促性腺激素的临床作用11
1.1.3 人绒毛膜促性腺激素的生产方法简介11-12 1.2 哺乳动物细胞表达系统生产重组蛋白药物12-14
1.2.1 国内外重组蛋白药物的发展进程12
1.2.2 中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达系统12-14 1.3 定点整合系统筛选稳定表达细胞株14-17
1.3.1 FLP-In定点整合系统的简介14-17
1.3.2 FLP-In定点整合系统的优点17 1.4 实时荧光定量PCR17-19
1.4.1 实时荧光定量PCR的简介17-18
1.4.2 实时荧光定量PCR的相对定量18-19
1.4.3 实时荧光定量PCR的绝对定量19
1.4.4 实时荧光定量PCR技术的应用19 1.5 外源基因在哺乳动物细胞表达过程中限制因素的研究19-21
1.5.1 载体设计、质粒整合和染色体环境20
1.5.2 mRNA的稳定性和加工处理20-21
1.5.3 蛋白质的翻译和分泌21 1.6 研究内容与研究意义21-23第2章 人绒毛膜促性腺激素表达载体的构建23-40 2.1 前言23 2.2 实验材料23-24
2.2.1 菌株和质粒23
2.2.2 培养基和溶液23-24
2.2.3 主要试剂、试剂盒、仪器设备及分析软件24 2.3 实验方法24-31
2.3.1 菌种培养和保藏24
2.3.2 质粒抽提步骤24-25
2.3.3 琼脂糖凝胶回收步骤25
2.3.4 DH5α大肠杆菌感受态细胞的制备步骤25-26
2.3.5 DH5α感受态细胞的转化26
2.3.6 包含两个PCMV-BGHpA表达框的pcDNA5/FRT载体构建26-28
2.3.7 含有α亚基的pcDNA5/FRT(2)-α载体的构建28-30
2.3.8 含有α亚基和β亚基的pcDNA5/FRT-hCGαβ载体的构建30-31 2.4 实验结果31-39
2.4.1 包含两个PCMV-BGHpA表达框的pcDNA5/FRT载体构建31-35
2.4.2 含有α亚基的pcDNA5/FRT(2)-α载体构建35-37
2.4.3 含有β亚基的pcDNA5/FRT-hCGαβ载体构建37-39 2.5 小结39-40第3章 FLP-In定点整合系统和流式细胞仪细胞分选技术的建立40-47 3.1 前言40 3.2 实验材料40-42
3.2.1 细胞株、质粒40-41
3.2.2 培养基和溶液41
3.2.3 实验试剂和仪器41-42 3.3 实验方法42-43
3.3.1 细胞培养42
3.3.2 质粒转染42
3.3.3 流式细胞仪检测细胞的转染效率42
3.3.4 FLP-In定点整合系统宿主细胞株的筛选42-43
3.3.5 FLP-In定点整合系统表达细胞株的筛选43 3.4 实验结果43-45
3.4.1 FLP-In定点整合系统宿主细胞系筛选转染效率的测定43-44
3.4.2 流式细胞仪分选细胞44-45 3.5 小结45-47第4章 CHO细胞表达rhCG蛋白的表达调控机理研究47-59 4.1 前言47 4.2 实验材料47-48
4.2.1 细胞株、培养基47
4.2.2 实验试剂和仪器47-48 4.3 实验方法48-52
4.3.1 总RNA抽提和hCG mRNA的测定48-49
4.3.2 hCG各亚基mRNA稳定性分析49
4.3.3 实时荧光定量PCR绝对定量标准品的制备49-50
4.3.4 转录速率分析50-51
4.3.5 ELISA方法检测hCG各亚基和完整hCG蛋白的浓度51-52 4.4 实验结果52-57
4.4.1 不同表达水平细胞株各亚基mRNA水平的比较52-53
4.4.2 不同表达水平细胞株各亚基mRNA稳定性的比较53-54
4.4.3 不同表达水平细胞株转录速率的比较54-55
4.4.4 不同表达水平细胞株胞内胞外α亚基多肽和β亚基多肽水平的比较55-56
4.4.5 不同表达水平细胞株胞内胞外完整rhCG蛋白浓度的比较56-57 4.5 小结57-59第5章 总结与展望59-61 5.1 总结59 5.2 主要创新点59-60 5.3 展望60-61参考文献61-68致谢68
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