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【求助】乳酸菌的培养
我初做乳酸菌对外源蛋白的表达，想请问各位大侠乳酸菌的培养基、培养方法，以及质粒提取方法！乳酸菌的培养基有很多种，如MRS、APT等培养基，依据你的菌种而定，大多数乳酸菌在37～42摄氏度下培养，具体的你可以参看凌代文的《乳酸菌分离鉴定及试验方法》这本书，你也可以留下你的邮箱地址，我传给你电子版。质粒的提取方法我转载我手头的资料了。内容如下：质粒提取一、导论
　　已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA， 这些方法都含有以下3个步骤：细菌培养物的生长。细菌的收获和裂解质粒DNA的纯化。 （一）细菌培养物的生长 　　从琼脂平板上挑取一个单菌落，接种到培养物中(有含有行当抗生素的液体培养基中生长)，然后从中纯化质粒，质粒的提纯几乎总是如此。现在使用的许多质粒载体（如pUC系列）都能复制到很高的拷贝数，惟致只要将培养物放在标准LB 培养基中生长到对数晚期，就可以大量提纯质粒。此时，不必造反性地扩增质粒DNA。然而，较长一代的载体(如pBR322)由于不能如此自由地复制，所以需要在得到部分生长的细菌培养物中加入氯霉素继续培养若干小时，以便对质粒进行性扩增。氯霉素可抑制宿主的蛋白质合成，结果阻止了细菌染色体的复制，然而，松弛型质粒仍可继续复制，在若干小时内，其拷贝数持续递增。这样，像pBR３２２－类的质粒，从经氯霉素处理和未经处理的培养物中提取质粒的产量迥然不同，前者大为增高。多年来，加入足以完全抑制蛋白质合成的氯霉素μg/ml)已成为标准的操作、用该方法提取的质粒DNA量，对于分子克隆中几乎所有想象到的工作任务。（二）细菌的收获和裂解　　细菌的收获可通过离心来进行，而细菌的裂解则可以采用多种方法中的任意一种，这些方法包括用非离子型或离子型去污剂、有机溶剂或碱进行处理及用加热处理等。选择哪一种方法取决于３个因素：质粒的大小、小肠杆菌菌株及裂解后用于纯化质粒DNA的技术。 尽管针对质粒和宿主的每一种组合分别提出精确的裂解条件不切实际，但仍可据下述一般准则来选择适当方法，以取得满意的结果。　　1)大质粒(大于15kb)容易受损，故应采用漫和裂解法从细胞中释放出来。将细菌悬于蔗糖等渗溶液中，然后用溶菌酶和EDTA进生处理，破坏细胞壁和细胞外膜，再加入SDS一类去污剂溶解球形体。这种方法最大限度地减小了从具有正压的细菌内部把质粒释放出来所需要的作用力。　　2)可用更剧烈的方法来分离小质粒。在加入EDTA后，有时还在加入溶菌酶后让细菌暴露于去污剂，通过煮沸或碱处理使之裂解。这些处理可破坏碱基配对，故可使宿主的线状染色体DNA变性，但闭环质粒DNA链由于处于拓扑缠绕状态而不能彼此分开。当条件恢复正常时，质粒DNA链迅速得到准确配置，重新形成完全天然的超螺旋分子。　　3)一些大肠杆菌菌株(如HB101的一些变种衍生株) 用去污剂或加热裂解时可释放相对大量的糖类，当随后用氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心进行质粒纯化时它们会惹出麻烦。糖类会在梯度中紧靠超螺旋质粒DNA所占位置形成一致密的、模糊的区带。因此很难避免质粒DNA内污染有糖类，而糖类可抑制多种限制酶的活性。 故从诸 如HB101和TG1等大肠杆菌蓖株中大量制备质粒时，不宜使用煮沸法。　　4)当从表达内切核酸酶A的大肠杆菌菌株(endA+株，如HB101) 中小量制备质粒时，建议不使用煮沸法。因为煮沸不能完全灭活内切核酸酶A，以后在温育(如用限制酶消化)时，质粒DNA会被降解。但如果通过一个附加步骤(用酚：氯仿进行抽提)可以避免此问题。　　５)目前这一代质粒的拷贝数都非常高，以致于不需要用氯霉素进行选择性扩增就可获得高产。然而，某些工作者沿用氯霉素并不是要增加质粒DNA的产量，而是要降低细菌细胞在用于大量制备的溶液中所占体积。大量高度粘稠的浓缩细菌裂解物，处理起来煞为费事，而在对数中期在增减物中加入氯霉素可以避免这种现象。有氯霉素存在时从较少量细胞获得的质粒DNA的量以与不加氯霉素时从较大量细胞所得到的质粒DNA的量大致相等。(三)质粒DNA的纯化 　　常使用的所有纯化方法都利用了质粒DNA 相对较小及共价闭合环状这样两个性质。例如，用氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心分离质粒和染色体DNA 就取决于溴化乙锭与线状以及与闭环DNA分子的结合量有所不同。 溴化乙锭通过嵌入奋不顾身碱基之间而与DNA结合，进而使双螺旋解旋。由此导致线状DNA的长度有所增加，作为补偿，将在闭环质粒DNA中引入超螺旋单位。最后，超螺旋度大为增加， 从而阻止了溴化乙锭分了的继续嵌入。但线状分子不受此限，可继续结合更多的染料，直至达到饱和( 每２个碱基对大约结合１个溴化乙锭分子) 。由于染料的结合量有所差别，线状和闭环DNA分了在含有饱和量溴化乙锭的氯化铯度中的浮力密度也有所不同。多年来，氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心已成为制备大量质粒DNA 的首选方法。然而该过程既昂贵又费时，为此发展了许多替代方法。其中主要包括利用离子交换层析、凝胶过滤层析、分级沉淀等分离质粒DNA和宿主DNA的方法。本实验室采用离子交换层析法已可得到极高纯度的质粒。二、质粒DNA的小量制备细菌的收获和裂解收获碱裂解法煮沸裂解质粒ＤＮＡ小量制备的问题与对策 　　质粒ＤＮＡ的小量制备可采用下述的碱裂解法或煮沸法（一）细菌的收获和裂解１．收获１）将2ml含相应抗生素的ＬＢ加入到容量为15ml 并通气良好（不盖紧）的试管中，然后接入一单菌落，于30℃剧烈振摇下培养过夜。２）将1.5ml培养物倒入微量离心管中，用微量离心机于4℃以12000g离心30秒，将剩余的培养物贮存于4℃。３）吸去培养液，使细菌沉淀尽可能干燥。除去上清的简便方法是用一次性使用的吸头与真空管道相连，轻缓抽吸，并用吸头接触液面。当液体从管中吸出时，尽可能使吸头远离细菌沉淀，然后继续用吸头通过抽真空除去附于管壁的液滴。２．碱裂解法１）将细菌沉淀，所得重悬于100μl用冰预冷的溶液Ｉ中，剧烈振荡。溶液Ｉ50mmol/L葡萄糖25mmol/L Tris．Cl(pH8.0)10mmol/LEDTA(pH8.0)溶液Ｉ可成批配制，每瓶约100ml,在10lbf/in2(6.895×104Pa) 高压下蒸气灭菌15分钟，贮存于4℃。须确使细菌沉淀在溶液Ｉ中完全分散，将两个微量离心管的管底部互相接触震荡，可使沉淀迅速分散。２）加200μl新配制的溶液Ⅱ。溶液Ⅱ0.2mol/L NaOH（临用前用10mol/L贮存液现用现稀释）1%SDS盖紧管口，快速颠倒离心管５次，以混合内容物。应确保离心管的整个内表面均与溶液Ⅱ接触。不要振荡，将离心管放置于冰上。３）加150μl用冰预冷的溶液Ⅲ 溶液Ⅲ5mol/Ｌ乙酸钾 60ml冰乙酸 11.5ml水 28.5ml所配成的溶液对钾是3mol/L，对乙酸根是5mol/L。盖紧管口，将管倒置后和地振荡10秒钟溶液Ⅲ在粘稠的细菌裂解物中分散均匀，之后将管置于冰上３－５分钟。４）用微量离心机于4℃12 000g离心5分种，将上清转移到另一离心管中。５）可做可不做：加等量酚：氯念， 振荡混匀， 用微量离心机于4 ℃以12000g离心２分钟，将上清转移到另一良心管中。有些工作者认为不必用酚：氯仿进行抽提，然而由于一些未知的原因，省略这一步，往往会得到可耐受限制酶切反应的DNA。６）用２倍休积的乙醇于室温沉淀双锭DNA。振荡混合， 于室温放置２分钟。７）用微量离心机于4℃以12 000g离心５分钟。８）小心吸去上清液，将离心管倒置于一张纸巾上，以使所有液体流出。再将附于管壁的液滴除尽。除去上清的简便方法是用一次性使用的吸头与真空管道相连，并用吸头接触液面。当液体从管中吸出时，尽量使吸头远离核酸沉淀，然后继续用吸头通过抽真空除去附于管壁的液滴。９）用1ml70%乙醇于4℃洗涤双链DNA沉淀，按步骤8）所术方法去掉上清，在空气中使核酸沉淀干燥10分钟。i.此法制备的高拷贝数质粒（如Ｘf3或pUC），其产量一般约为：每毫升原细菌培养物3－5μg。ii．如果要通过限制酶切割反应来分析DNA，可取1μl DNA溶液加到另一含８μl水的微量离心管内，加1μl 10×限制酶缓冲液和１单位所需限制酶， 在适宜温育1－2小时。将剩余的DNA贮存于－20℃。iii.此方法按适当比例放大可适用于100ml细菌培养物：３．煮沸裂解１）将细菌沉淀，所得重悬于350μlSTET中。STET0.1mol/L NaCL10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)1mmol/L EDTA(pH8.0)5% Triton X-100２）加25μl新配制的溶菌酶溶液[10mg/ml,用10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)配制]，振荡3秒钟以混匀之。如果溶淮中pH低于8.0，溶菌酶就不能有效发挥作用。３）将离心管放入煮沸的水浴中，时间恰为40秒。４）用微量离心机于室温以12 000g离心10分种。５）用无菌牙签从微量离心管中去除细菌碎片。６）在上清中加入40μl 5mol/L乙酸钠（pH5.2）和420μl异丙醇，振荡混匀，于室温放置5分钟。７）用微量离心机于4℃以12 000g离心5分种，回收核酸沉淀。８）小心吸去上清液，将离心管倒置于一张纸巾上，以使所有液体流出。再将附于管壁的液滴除尽。除去上清的简便方法是用一次性使用的吸头与真空管道相连，轻缓抽吸，并用吸头接触液面。当液体从管中吸出时，尽可能使吸头远离核酸沉淀，然后继续用吸头通过抽真空除去附于管的液滴。９）加1ml 70％乙醇，于4℃以12 000g离心２分钟。10）按步骤8）所述再次轻轻地吸去上清，这一步操作要格外小心，因为有时沉淀块贴壁不紧，去除管壁上形成的所有乙醇液滴，打开管口，放于室温直至乙醇挥发殆尽，管内无可见的液体（2－5）分钟。11）用50μl含无DNA酶的胰RNA酶（20μg/ml）的TE(pH8.0)溶解核酸稍加振荡，贮存于-20℃。注：当从表达内切核酸酶Ａ的大肠杆菌株（endA+株，如HB101 ）中小量制粒尤其DNA时，建议舍弃煮沸法。因为煮沸步骤不能完全灭活内切核酸酶Ａ，以后在Mg2+存在下温育（V中用限制酶时）质粒DNA可被降解。 在上述方案的步骤９）之间增加一步，即用酚：氯仿进行抽提，可以避免这一问题。（二）质粒ＤＮＡ小量制备的问题与对策 　　裂解和煮佛法都极其可靠，重复性也很好，而且一般没有会么麻烦。多年来，在我们实验室中日常使用这两种方法的过程中，只碰到过两个问题：１）有些工作者首次进行小量制备时，有时会发现质粒DNA不能被限制酶所切割，这几乎总是由于从细菌沉淀或从核酸沉淀中去除所有上清液时注意得不够。大多数情况下，用酚：氯仿对溶液进行抽提可以去除小量备物中的杂质。如果总是依然存在，可用离心柱层析注纯化DNA。２）在十分偶然的情况下，个别小时制备物会出现无质粒DNA的现象。这几乎肯定是由于核酸沉淀颗粒已同乙醇一起被弃去。 三、质粒ＤＮＡ的大量制备在丰富培养基中扩增质粒细菌的收获和裂解收获碱裂解法（一）在丰富培养基中扩增质粒　　许多年来，一直认为在氯霉素存在下扩增质粒只对生长在基本培养基上的细菌有效，然而在带有pMBl或ColEl复制子的高拷贝数质粒的大肠杆菌菌株中，采用以下步骤可提高产量至每500ml培养物2－5mg质粒DNA，而且重复性也很好。１）将30ml含有目的质粒的细菌培养物培养到对数晚期（DNA 600约0.6)。培养基中应含有相应抗生素，用单菌落或从单菌落中生长起来的小量液体闭关物进行接种。２）将含相应抗生素的500ml ＬＢ或Terrific肉汤培养基（预加温至37℃）施放入25ml对数晚期的培养物，于37℃剧烈振摇培养25小时（摇床转速300转/分），所得培养物的OD 600值约为0.4。３）可做可不做：加2.5ml氯霉素溶液（34mg/ml溶于乙醇），使终浓度为170μg/ml。像pBR322一类在宿主菌内只以中等拷贝娄竿行复的质粒，有必要通过扩增。这些质粒只要从生长达到饷新一代的质粒（如pUC质粒）可复制达到很高的拷贝数，因此无需扩增。这些质粒只要从生长达到饱和的细菌培养物即可大量提纯。但用氯霉素进行处理，具有抑制细菌复制的优点，可减少细菌裂解物的体积和粘稠度，极大地简化质粒纯化的过程。所以一般说来，尽管要在生长中的细菌培养物里加入氯霉素略显不便，但用氯霉素处理还是利大于弊。４）于37℃剧烈振摇（300转/分），继续培养12-16小时。（二）细菌的收获和裂解１．收获１）用合适转头于4℃以4000转/分离心15分钟，弃上清，敞开离心管口并倒置离心管使上清全部流尽。２）将细菌沉淀重悬于100ml用冰预冷的STE中。STE0.1mol/L NaCl10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)1mmol/L EDTA(pH8.0)２）按步骤１）所述方法离心，以收集细菌细胞。２，碱裂解法１）将冼过的500ml 培养物的细菌沉淀物[ 来自收获细菌的步骤3] 重悬于10ml（18ml）溶液Ｉ中。溶液Ｉ50mmol/L葡萄糖25mmol/L Tris.Cl(pH8.0)10mmol/L EDTA(pH8.0)溶液Ｉ可成批配制，在10 lbf/in2(6.895x104Pa)高压下蒸气灭菌15分钟，贮存于４℃。２）加1ml(2ml)新配制的溶菌酶溶液[10mg/ml,溶于10mmol/L Tris.Cl(pH8.0)]。当溶液的pH值低于8.0时，溶菌酶不能有效工作。３）加20ml(40ml)新配制的溶液Ⅱ。溶液Ⅱ0.2mol/L NaOH(临用前用10mol/L贮存液现用现稀释）1％SDS盖紧瓶盖，缓缓颠倒离心瓶数次，以充分混匀内容物。于室温放置5-10分钟。４）加15nl(20ml)用冰预冷的溶液Ⅲ。溶液Ⅲ5mol/L乙酸钾 60ml冰乙酸 11.5ml水 28.5ml所配成的溶液对钾是３mol/L，对乙酸根是5mol/L。封住瓶口，摇动离心瓶数次以混匀内容物，此时应不再出现分明的两个液相。置冰上放10分钟，应形成一白色絮状沉淀。于0℃放置后所形成的沉淀应包括染体DNA、 高分子量RNA和钾－SDS－蛋白质－膜复合物。５）用合适转头于4℃以4000转/分离心15分钟，不开刹车而使转头自然停转。如果细菌碎片贴壁不紧，可以5000转/分再度离心20分钟， 然后尽可能将上清全部转到另一瓶中，弃去残留在离心管内的粘稠状液体。未能形成致密沉淀块的原因通常是由于溶液Ⅲ与细菌裂解物混合不充分[步骤４）]。６）上清过滤至一250ml离心瓶中，加0.6体积的异丙醇，充分混匀，于室温放置10分钟。７）用合适转头于室温以500转/分离心15分钟，回收核酸。如于4℃离心，盐也会了生沉淀。８）小心倒掉上清，敞开瓶口倒置离心瓶使残余上清液流尽，于室温用70％乙醇洗涤沉积管壁。倒出乙醇，用与真空装置相联的巴期德吸出附于瓶壁的所有液滴，于室温将瓶倒置放在纸巾上，使最后残余的痕量乙醇挥殆尽。９）用3ml TE(pH8.0)溶解核酸沉淀。10）纯化。四、质粒ＤＮＡ的纯化聚乙二醇沉淀法质粒ＤＮＡ氯化铯－溴化乙锭梯度平衡离心法纯化闭环ＤＮＡ（一）聚乙二醇沉淀法提取质粒ＤＮＡ１）将核酸溶液所得]转入15mlＣorex 管中， 再加3ml 用冰预冷的5mol/L LiCl溶液，充分混匀，用合适转头于４℃下以10 000转/分离心10分钟。LiCl可沉淀高分子RNA。２）将上清转移到另一30mlCorex管内，加等量的异丙醇， 充分混匀， 用SorvallSS34转头（或与其相当的转尖）于室温以10 000转/分离心10分钏， 回收沉淀的核酸。３）小心去掉上清，敞开管口，将管倒置以使最后残留的液滴流尽。于室温用70％乙醇洗涤沉淀及管壁，流尽乙醇，用与真空装置相连的巴其德吸管吸去附于管壁的所有液滴，敞开管口并将管侄置，在纸巾上放置几分钟，以使最后残余的痕量乙醇蒸发殆尽。４）用500μl含无DNA酶的胰RNA酶(20μg/ml ）的TE（pH8.0）溶解沉淀，将溶液转到一微量离心管中，于室温放置30分钟。５）加500μl含13％（w/v)聚乙二醇（PEG 8000）的1.6mol/L NaCl,充分混合，用微量离心机于４℃以12000g离心５分钟，以回收质粒ＤＮＡ。６）吸出上清，用400μl TE(pH8.0)溶解质粒DNA沉淀。用酚、酚：氯仿、氯仿各抽１次。７）将水相转到另一微量离心管中，加100μl 10mol/L乙醇铵，充分混匀，加２倍体积（约1ml）乙醇，于室温放置10分钟，于4℃以12 000g离心5分钟，以回收沉淀的质粒ＤＮＡ。８）吸去上清，加200μl处于4℃以12 000g离心2分钟。９）吸去上清，敞开管口，将管置于实验桌上直到最后可见的痕量乙醇蒸发殆尽。10）用500μl TE（pH8.0）溶解沉淀1:100稀释[用TE（pH8.0)] 后测量OD 260，计算质粒DNA的浓度（1OD260＝50μg质粒DNA/ml）， 然后将DNA贮于－20℃。真的很谢谢你！我的email:wuxianfeng,您好，我也做乳酸菌，《乳酸菌分离鉴定及试验方法》对我很有帮助，一直找不到他，能给我也发一份吗，谢谢了我的邮箱是wuxianfeng,您好，我也做乳酸菌，《乳酸菌分离鉴定及试验方法》对我很有帮助，一直找不到他，能给我也发一份吗，谢谢了我的邮箱是wuxianfeng,也给我 发一份,谢谢!!邮箱:wuxianfeng，您好！能否给我发一份《乳酸菌分离鉴定及试验方法》，非常感谢！我的邮箱是xaf.我也急需《乳酸菌分离鉴定及试验方法》，真的感谢啦我的邮箱：十分感谢我的邮箱：十分感谢能麻烦您给我也传一份吗？我正要开始筛选乳酸菌，尚无头绪。太谢谢了。麻烦传我一份电子版 hehx@麻烦给我发一份，，感激不尽！麻烦给我发一份，，感激不尽！能给我一份吗？cwm_，非常感谢！
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111位同学学习过此题，做题成功率87.3%
回答下列有关泡菜制作的问题:(1)制作泡菜时,所用盐水需煮沸,其目的是&&&&。为了缩短制作时间,有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液,加入陈泡菜液的作用是&&&&。(2)泡菜制作过程中,乳酸发酵的过程即为乳酸菌进行&&&&的过程。该过程发生在乳酸菌细胞的&&&&中。(3)泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有&&&&、&&&&和&&&&等。(4)从开始制作到泡菜品质最佳这段时间内,泡菜液逐渐变酸,这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是&&&&,原因是&&&&。杀灭杂菌 增加乳酸菌数量&
本题难度：一般
题型：解答题&|&来源：2014-高三生物一轮总复习资源包专题19生物技术在食品加工中的应用
分析与解答
习题“回答下列有关泡菜制作的问题:(1)制作泡菜时,所用盐水需煮沸,其目的是____。为了缩短制作时间,有人还会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液,加入陈泡菜液的作用是____。(2)泡菜制作过程中,乳酸发酵的过程即为...”的分析与解答如下所示：
(1)制作泡菜时,需要乳酸菌进行发酵,同时又要防止杂菌污染,因此需将所用盐水煮沸灭菌;陈泡菜液中含有大量的乳酸菌,加入陈泡菜液后,增加乳酸菌数量,加速乳酸产生。(2)乳酸菌是厌氧型生物,因此乳酸发酵过程是乳酸菌进行无氧呼吸的过程。乳酸菌是原核细胞,其无氧呼吸发生在细胞质中。(3)在泡菜制作过程中,要注意控制腌制的时间、温度和食盐的用量等。(4)由于乳酸菌比杂菌更为耐酸,所以在酸性环境中,乳酸菌能够正常地增殖,而其他杂菌繁殖将受到抑制,所以在此过程中,乳酸菌数量增多,杂菌数量减少。
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生物技术在食品加工及其他方面的应用
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下表是某蛋白质混合液中的不同蛋白质从开始析出到完全析出所需要的蛋白质混合液中的硫酸铵浓度范围。下列分析错误的是&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&蛋白质混合液中的硫酸铵浓度（%）析出的蛋白质15～20甲蛋白23～30乙蛋白25～35丙蛋白38～40丁蛋白&&&&&&&& A．蛋白质在析出过程中，空间结构没有改变 B．硫酸铵浓度为30%时，甲蛋白、乙蛋白将从蛋白质混合液中析出 C．硫酸铵浓度为20%时，可从蛋白质混合液中分离出甲蛋白 D．混在析出蛋白质中的硫酸铵可用透析法除去
下列对植物芳香油理解正确的一项是组成成分主要是烃类化合物及其衍生物来源广泛，几乎所有植物的任何器官都可提取芳香油具有较强的挥发性且极易溶于有机溶剂，不溶于水植物芳香油可从野生真菌中提取
在玫瑰油与水的混合物里加入NaCl,目的是&&&&使乳化液分层除水分离油层和水层结晶
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　　英语教育要从娃娃抓起。有一天，幼稚园的老师在教小朋友学习字母，老师说：AB（一声）CD...然而下面有个小朋友就是不念，老师就问：你为什么不念？
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山西新闻网 三晋都市报 本报讯今年11月1日起，《山西省重点工业污染监督条例》将正式实施。这标志着，对影响我省环境的重点工业污染监督，已被纳入法制化轨道。这是记者19日从省人大了解到的。《条例》规定，各级人民政府对本行政区域的环境质量负责其行政首长是重点工业污染监督工作的第一责任人；禁止无《排污许可证》排放污染物，排污企业应保证防治污染实施的正常运行，不得擅自拆除、闲置或者不正常使用，确有必要拆除或闲置的，必须事先报县级以上人民政府环保行政主管部门批准。市、县人民政府要建立全省统一的重点工业污染自动监控系统；排污企业应当在规定期限内安装自动监控系统，并与全省统一的污染自动监控系统联网，确保正常运行。金堆城娱乐论坛:乳酸菌是对身体有益的菌群近日，有知情者向中国经济时报记者举报称，日晚9点，位于山西省朔州市山阴县马营乡青羊岭村辛庄煤矿发生一起严重透水事故。事故发生后，该矿没有按照相关规定上报有关部门，也没有进行积极有效的救援行动，而是连夜把所有矿工转移或遣散，导致井下至少有30人遇难。此矿难事故被举报后，12月8日，当地相关部门组成调查组进驻该矿进行事故调查。但时至今日，事故发生的原因和遇难矿工人数一直没有公布。举报人称，山阴县政府有故意瞒报这起煤矿生产安全事故的嫌疑。日，中国经济时报记者前往事故发生地山阴县调查采访。违法生产突发事故？记者了解到，辛庄煤矿全称为“山西山阴辛庄煤业有限公司”，此前为山阴县北周庄镇辛庄煤矿，年生产能力为15万吨，获批准开采6＃、9＃、11＃煤层，柴政任矿长。据山阴县有关部门的工作人员介绍，这个煤矿是属于资源整合型的矿井，早就停产了。辛庄煤矿日已经被责令停产，至今没有获发复产通知书。此次矿难事故发生后，由于消息被封锁，事故死亡人数目前不详。不过，山阴县相关部门领导承认事故属实，已经按程序逐级上报到各级相关部门。事故发生后，朔州市辖区内煤矿全部停产。据了解，12月8日，接到上级通知后，相关部门立即组成调查组进驻该矿。目前，发现井下9＃煤层有水，由于该矿没有积极上报，井下出水原因不明，具体井下有无人员伤亡，只能等到排完水后才能清楚。12月22日下午，在知情人老王的带领下，记者顺着山谷里一条布满河卵石的小路到了山阴县马营乡青羊岭村，远远看到这里的村民大都居住在依山而建的土窑洞或用石头垒的窑洞里。辛庄煤矿就紧靠在村子的东边，矿上的煤场与住户的最近距离不超过10米。记者在现场看到，煤矿的两扇大铁栅门紧锁着，大门内的一排房前停放了几辆越野车，自称是看门的人说：“煤矿根本就没有生产，哪会发生事故？”而记者看到，在井口的煤场里有煤像两座小山一样堆在那里。老王带领记者绕过大门，顺着村里的盘山小道进入矿区，他指着煤场上的那两堆煤说，“凭经验看，这煤从井下挖出来没有几天，根本就不像是停产前挖出的煤。”在青羊岭村，一位幸免于难、不愿透露姓名的矿工对记者说，12月5日晚上9点多，当班的他突然看到有七八个人从井下连滚带爬地跑上来，说井下9＃层发生透水事故了。随后在晚10点左右，矿上通知所有当班的工人下班。平时每个班入井人数基本都是三四十人，当时在井下作业的矿工应该有30余人，由于井下透水很突然，大部分人员来不及逃离。从看见有人跑上来到通知下班的这段时间里，他亲眼看到上来的只有那几个人。青羊岭村的村民们说，辛庄煤矿又叫后沟煤矿，是个有几十年矿龄的老矿。自从煤矿承包给了个人后，矿主担心一旦出了矿难事故对本地矿工不好交代，现在就不招本地的工人来矿上班。每个班有多少人在井下作业，除了矿主和包工头，别人谁也不知道。据老王说，事故发生后，两个包工头也跑了，一直就没有再露过面。22日傍晚，太阳落山的时候，记者悄悄走近一户亮着灯的人家，以在山里收购野兔和野鸡冻得厉害想暖暖身子的名义征得主人同意后，进屋与在家的女主人聊了起来。这位大嫂对记者说，他们是来自陕西的打工者，她丈夫也在附近的煤矿上班，他们来青羊岭村住了快四个月了，本来想尽快把挣的那点钱结了，赶在春运高峰前回老家过年，没想到辛庄煤矿上出了事故，她老公干活的那个煤矿也受到了影响，只能偷偷地生产出煤。她说他们心里很害怕，也很着急，想着赶紧把投资近万元买来的、在矿井下拉煤的三轮车卖了就回家。她说：“再穷再苦也不会到这里挖煤了，太危险了。”“这个出事儿的煤矿手续不全，是个黑矿，一出事儿矿老板就跑了，水太大了，没人救。”这位不愿透露姓名的大嫂说，“一个班下去有好几个队，其中的9＃层一个队出了事，听说四十个人只上来了八个人，基本上都是湖北人，一出事故包工头就通知把所有的人都弄走了，家属们都给弄到内蒙了。矿方被指救援不力记者在现场看到，在煤矿的办公区门前停了几辆高级越野车，井口的东侧一排平房前停放了一辆有标识的抢险救援车，井口前没有一个救援人员的身影，只看见有一个人在办公区的门前不停地打电话。矿工的宿舍门都打开着，室内一片狼藉，窗台上还放有洗衣粉，床铺上散放着一些丢弃的旧衣物。“半个月了都没人救，如果这次事故遇难的矿工有本地人，就不是现在的这个抢救法儿了。”陕西籍矿工家的大嫂对记者说，“要是有本地人的话，家属就会去政府告状，救援力度就会加大。9＃层透水后水已经涨到6＃层口了，那碗口粗的水管抽出来的水没有直接排到地面上，又直接排进了6＃层，而6＃层和9＃层还通着，抽出来的水又从6＃层漏到9＃层，这么抽永远也抽不干。”她还说：“从事故发生到现在已经半个多月了，也没有看见从外面调来大型设备进行救援，即使当时井下有活着的也错过了抢救时间。”已上报还是瞒报？辛庄煤矿透水事故发生后，矿方是否按规定及时向上级主管部门报告？有没有采取及时有效的救援行动？对此，记者于日分别在山阴县和朔州市对相关部门进行了采访。在山阴县委宣传部，县委宣传部通讯组长吕建全接受了记者的采访。记者：这起事故上报了没有？报到哪一级了？吕建全：已经上报到省市两级煤炭系统的相关单位。记者：事故发生后，当地政府有关部门和矿方都采取了哪些救援措施？包括救援器材、资金的投入和相关救援领导组成员的组成情况？吕：正在抽水，有救护队在那里救援。这个矿在6月28日已经被责令停产了，水从何来不清楚，井下有没有人也不知道，也可能没人。记者：事故煤矿的性质？证照是否齐全？吕：原来是乡办煤矿，后来变为股份制企业，证照是否齐全我不太清楚。记者：对事故的责任人采取了什么控制措施？吕：不清楚。记者：下一步将会采取哪些有效的救援措施？吕：这就得根据排水情况，进一步采取措施了。山阴县国土资源局矿产管理股一位拒绝透露姓名的工作人员称，辛庄煤矿的采矿证有效期为2006年至2011年，核定产量为15万吨／年，可开采煤层为6＃、9＃、11＃。对于此次事故的情况，他们声称不知情也未听说。山阴县安全生产监督管理局(即山阴县煤管局，一套人马两块牌子)调度室的值班人员则称，他们没有听说日辛庄煤矿发生过事故，也没有接到任何事故报告。朔州市安全生产监督管理局一位不愿具名的局长对记者说：“我们不知道这个事故，也没有接到事故报告。按照程序是应该通知我们参与事故调查，事故调查结果出来后再做处理决定。”山西省煤矿安全监察局朔州分局调度室张姓值班人员对记者说：“我们知道这个事儿，但不是逐级上报的，是省局接到国家局一个领导的电话通知，说有人举报山阴县辛庄煤矿发生了一起死亡12人的煤矿事故。也没有提供任何线索，仅仅一个电话说死人了，省局又电话通知我们去核实。”对于调查的结果，这位张姓值班人员说：“我们局里去过三四拨人，局长带着人也去过，经过调查没有发现过事故迹象，我们以书面和电话的形式向省局汇报过了调查情况。事故调查是由山阴县政府具体组织实施，具体结果我不太清楚。”
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