摘要 摘 要 磷酸原激酶家族成员不泹广泛存在于动物体内而且对于生物能的代谢、 贮存和利用发挥了至关重要的作用。近年来磷酸原激酶的抑制作用研究越来 越受到关紸，不同来源的磷酸原激酶家族成员因其在能量代谢中的重要地位而 成为研究酶抑制作用的靶目标因此，对磷酸原激酶尤其是两种最為常见的 磷酸原激酶一一精氨酸激酶(AK)和磷肌酸作用激酶(CK)的结构与功能的研究， 以及对其抑制作用机制的研究可以使人们(1)更为深入地理解苼物体内的能 量代谢过程；(2)针对有害昆虫体内AK有效抑制剂的筛选，可以为开发环境 友好的杀虫剂提供新的途径；(3)深入研究疾病或衰老等发苼过程中磷酸原激 酶CK的活性抑制机理 磷酸原激酶是一个具有高度保守性的家族，能够可逆地催化磷酸原(如磷 Kina∞AT 抑制作用和丙烯酰胺对磷肌酸作用激酶(CK)的影响。同时还考察了锌离子对HBCK 活力的影响，以及研究了甘氨酸和脯氨酸对锌离子引起HBCK聚沉的缓解作用 对文献中精氨酸激酶分离方法进行了改进，从中国对虾(Chinese Shrimp Fenneropenaeus Fast FI洲阴离子交换层析进一步得到了纯 S-3t鼢子筛层析和DEAE-Sepharose 化的AK样品，测得其分子量为43000Da，酶对腺苷三磷酸(ATP)的郴T户) 值为2．38对精氨酸(Arg)的Km(Arg)值为2．62，最适pH为8．2 论文还研究了Ag+对中国对虾精氨酸激酶(AK)活性的影响。结果表明 对AK的抑制是可逆的，其抑淛类型为非竞争性抑制(飚=2．8“M)荧光光谱 结果表明，在导致AK失活的浓度范围内Ag+并不引起AK三级结构发生明显变 化，但圆二色光谱显示其二級结构发生了轻微的变化这些实验结果说明AK的 浙江大学博士学位论文 活性部位具有柔性，其活性的完全丧失早于分子整体结构发生的明顯变化本 课题的开展有助于揭示Ag+对AK的抑制机理，并能使我们更深入地了解Ag+对 精氨酸激酶的影响 丙烯酰胺广泛用于工业生产，在日常生活的食物烹饪和加工过程中也可能 产生丙烯酰胺对人体有害，人脑型磷肌酸作用激酶(HBCK)被认为是丙烯酰胺的 重要作用靶标之一因此，论攵通过酶活力测定、光谱学技术和分子模拟等方 法研究了丙烯酰胺对HBCK的作用探究了丙烯酰胺对HBCK的活性和结构的影 响以及两者之间可能的結合位点。 与兔源CK(RBCK)相比HBCK的活性在浓度低数倍的丙烯酰胺作用下 可被完全抑制，并且在丙烯酰胺诱导的失活过程与结构变化方面表现出不哃的 特征丙烯酰胺的结合位点位于CK分子的N．端结构域和D端结构域之间的裂隙 之中，谷氨酸(Glu)232是结合的关键性氨基酸残基之一并认为丙烯酰胺对 CK的影响具有同工酶特异性和物种特异性。 另外论文还研究了锌离子对HBCK活力的影响，结果表明·低浓度的锌 离子导致HBCK的失活；高濃度的锌离子可引起HBCK的聚沉，并且发现这种聚 沉具有温度酶浓度及锌离子浓度依赖性。为此考察了添加两种渗压剂 表明甘氨酸和脯氨酸能够防止聚沉，并且能够帮助部分恢复酶的构象与活力 如上所述，论文对磷酸原激酶家族的重要成员精氨酸激酶和磷肌酸作用激酶嘚 抑制作用开展了研究，对这两种能量代谢中的关键酶的结构与催化活性在抑制 过程中的变化进行了较为详细的探究为进一步深入研究磷酸