OPD显色液是ELISA中的zui后一步温育反应此时酶催化无色的底物生成有色的产物。反应的温度和时间仍是影响OPD显色液的因素在一定时间内，阴性孔可保持无色而阳性孔则随时間的延长而呈色加强。适当提高温度有助于加速OPD显色液进行在定量测定中，加入底物后的反应温度和时间应按规定力求准确定性测定嘚OPD显色液可在室温进行，时间一般不需要严格控制有时可根据阳性对照孔和阴性对照孔的OPD显色液情况适当缩短或延长反应时间，及时判斷

    OPD底物OPD显色液一般在室外温或37℃反应20-30分钟后即不再加深，再延长反应时间可使本底值增高。OPD底物液受光照会自行变色OPD显色液反应应避光进行，OPD显色液反应结束时加入终止液终止反应OPD产物用硫酸终止后，OPD显色液由橙黄色转向棕黄色

TMB受光照的影响不大，可在室温中置於操作台上边反应观察结果。但为保证实验结果的稳定性宜在规定的适当时间阅读结果。TMB经HRP作用后约40分钟OPD显色液达顶峰，随即逐渐減弱至2小时后即可完全消退至无色。TMB的终止液有多种叠氮钠和十二烷基硫酸钠（SDS）等酶抑制剂均可使反应终止。这类终止剂尚能使蓝銫维持较长时间（12-24小时）不褪是目视判断的良好终止剂。此外各类酸性终止液则会使蓝色转变成黄色，此时可用特定的波长（450nm）测读吸光值

比色前应先用洁净的吸水纸拭干板底附着的液体，然后将板正确放入酶标比色仪的比色架中以软板为载体的试验，需先将板置於标准96孔的座架中才可进行比色。zui好在加底物液OPD显色液前先将软板边缘剪净，这样此板就可完全平妥坐入座架中。比色时应先以蒸餾水校零点测读底物孔（未经任何反应仅加底物液的孔）和空白孔（以生理盐水或稀释液代替标本作全过程的孔），以记录本次试验的試剂状况其后可用空白孔以蒸馏水校零点，以上各孔的吸光度需减去空白孔的吸光度然后进行计算。

    比色结果的表达以往通用光密度（oplical densityOD），现按规定用吸光度（absorbenceA），两者含义相同通常的表示方法是，将吸收波长写于A字母的右下角如OPD的吸收波长为492nm，表示方法为"A492nm"或"OD492nm"

酶标比色仪简称酶标仪，通常指专用于测读ELISA结果吸光度的光度计针对固相载体形式的不同，各有特制的适用于板、珠和小试管的设计许多试剂公司配套供应酶标仪。酶标仪的主要性能指标有：测读速度、读数的准确性、重复性、度和可测范围、线性等等优良的酶标儀的读数一般可到0.001，准确性为±1%重复性达0.5%。举例说若某孔测得的A值为1.083，则该孔相对于空气的真实A值应为1.083±0.01（1.073~1.093）重复测定数次，其A值均应1.083±0.05（1.078~1.088）在之间酶标仪的可测范围视各酶标仪的性能而不同。普通的酶标仪在0.000~2.000新型号的酶标仪上限拓宽达2.900，甚至更高应注意可测范围与线性范围的不同，线性范围常小于可测范围比如某一酶标仪的可测范围为0.000~2.900，而其线性范围仅0.000~2.000这在定量ELISA中制作标准曲线时应予注意。

    酶标仪不应安置在阳光或强光照射下操作时室温宜在15~30℃，使用前先预热仪器15-30分钟测读结果更稳定。

测读A值时要选用产物的敏感吸收峰，如OPD用492nm波长有的酶标仪可用双波长式测读，即每孔先后测读两次*次在zui适波长（W1），第二次在不敏感波长（W2）两次测定间不移動ELISA板的位置。例如OPD用492nm为W1630nm为W2，zui终测得的A值为两者之差（W1-W2）双波长式测读可减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。

opd症状和诊断是的内容医学|教育網整理如下：

①慢性、咳痰，常晨间咳嗽或夜间阵咳清晨排痰较多，痰多呈白色黏液或浆液性泡沫性痰偶可带血丝。急性发作期痰量增多可有脓性痰；

②逐渐加重的气短或呼吸困难，早期在劳力时出现后逐渐加重，以致在日常活动甚至休息时也感到气短；

③喘息和胸闷重度患者或急性加重时可出现喘息。

根据吸烟等高危因素史、临床表现及肺功能检查（吸入支气管扩张药后FEV1/FVC