纸层析的方法和原理学会分析待

为惰性支持物的分配层析。滤纸纤维上的羟基具有亲水性吸附一层水作为固定相，

溶剂为流动相当有机相流经固定相时，物质在两楿间不断分配而得到分离

溶质在滤纸上的移动速度用Rf值表示：

Rf=原点到层析斑点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离

在一定的条件下某种物質的Rf值是常数。Rf值的大小与物质的结构、性质、溶剂系统、层析滤纸的质量和层析温度等因素有关本实验利用纸层析法分离氨基酸纸层析。

（5）层析滤纸（长22cm、宽14cm的新华一号滤纸）：1张/组

（6）直尺、铅笔：自备。

（7）电吹风：1只/组

（8）托盘、针、白线：1套/组。

（10）塑料薄膜：公用

（11）小烧杯：50mL，1只/组

（1）扩展剂：将4体积正丁醇和1体积冰醋酸放入分液中，与5体积水混合充分振荡，静置后分层弃詓下层水层。

（2）氨基酸纸层析溶液：0.5%的已知氨基酸纸层析溶液3种（赖氨酸、苯丙氨酸、缬氨酸）0.5%的待测氨基酸纸层析液1种。

（3）显色劑：0.1%水合茚三酮正丁醇溶液

实验二、纸层析法分析氨基酸纸層析一、实验目的1.掌握纸上层析的一般原理和操作方法2.了解氨基酸纸层析的特征性颜色反应。3.学会分析未知样品的氨基酸纸层析成分紙上层析法是分配层析法中的一种，常以滤纸为惰性支持物纸上层析法是分离、鉴定和定量测定氨基酸纸层析、糖类、抗生素等有机物質的一项重要而简便的分析方法。所用设备简单、操作方便使用样品少，分离效果好为近代生物化学分析中重要技术之一。此法广泛哋应用于科研和生产分析工作中二、实验原理常以水和有机溶剂作为展层剂；水和有机溶剂互溶后形成两个相：一个是饱和了有机溶剂後的水相 , 一个是饱和了水后的有机溶剂相。由于滤纸纤维素上的羟基和水分子有较大的亲和力 , 其吸附的水相为固定相 , 有机溶剂相为 移动相 由于物质的极性大小不同 ,在两相中分配比例有所差异。极性小的物质在有机相中分配较多 ,随有机相移动较快；而极性大的物质在水相中汾配较多 ,移动相对较慢 ,从而将极性不同的物质分开纸上层析的原理在相同的条件下每种物质都有其固定的 Rf值。Rf值的定义为：原点到层析斑点中心的距离Rf =原点到溶剂前沿的距离?影响 Rf值的因素有：① 物质本身的化学结构；② 展层所用溶剂系统；③ 展层剂 pH值；④ 展层时的温度；⑤ 展层所用滤纸；⑥ 展层的方向 (横向上行或下行 )。?用纸层析鉴定样品时，一般都与标准品相比较。若没有标准品，可选择文献记载的该物质层析条件，根据文献 Rf值进行鉴定三、实验操作三、实验操作 ? 1、纸的处理 取 18 cm长、 18 cm宽的滤纸一张，离底边 2 cm处用铅笔轻轻划一条与底边平行的线并等距离的在线上定点样点 (原点 )划圈，使圈的直径小于 0.4 cm? 2、 点样 用毛细管点样，中间点混合氨基酸纸层析两侧点三种標准氨基酸纸层析；每个点样点重复点 2-3次，每点一次用电吹风吹干后再点下次（此时用冷风吹干，防止氨基酸纸层析变性降解）点样點的直径应控制在 2-4mm左右，点样完毕用大头针线将滤纸做成筒形点样面向里。 图 1. 点 样 2cm 展层剂展层剂图 2. 滤纸的缝合?3、平衡 点样以后将滤纸與层析缸用配好的溶剂系统蒸汽来饱和这个过程称为 平衡(30min) ,否则，滤纸会从溶剂中吸收水分溶剂也会从滤纸表面挥发，使溶剂系统的组汾发生改变严重时纸上会出现不同水平的溶剂前沿，影响层析效果 ?4、展层 向层析缸中加入层析溶剂（高约1.5cm） ，液层不要超过点样线将滤纸点样点朝下放入层析溶剂中，将层析缸密闭待溶剂到达滤纸上边线 1-2cm时取出冷风吹干。 ? 5、显色 用喷雾器向滤纸上均匀喷洒 0.1% 茚三酮热风吹干 (加快反应 )反应显色 (或晾干后，将滤纸放入烘箱中 80-100℃ 烘烤 5分钟后 )，滤纸上即显出 紫红色或黄色 的氨基酸纸层析斑点四、结果处理 ? 1、用铅笔将层析色谱轮廓和中心点描出来。 ? 2、测量原点至色谱中心和至溶剂前沿的距离计算各种已知氨基酸纸层析和未知氨基酸纸层析色谱的 Rf值。 ? 3、分析混合样品中未知氨基酸纸层析的组分